جداسازي باكتري هاي تجزيه كننده كريزن از خاك‏هاي منطقه ويژه اقتصادي انرژي پارس (عسلويه) و بررسي حذف كريزن توسط آن‏ها

Isolation of Chrysene Degrading Bacteria from Soils of Pars Special Economic Energy Zone (Assaluyeh) and Investigating Chrysene Removal by Them

زمينه و هدف: هيدروكربن هاي آروماتيك چند حلقه اي به دليل سميت، سرطان زايي و نيز مقاومت نسبت به تجزيه باكتريايي، يكي از عوامل تهديد كننده محيط زيست محسوب مي‏شوند. كريزن يك تركيب آروماتيك 4 حلقه اي است. در اين تحقيق باكتريهاي تجزيه كننده كريزن از خاكهاي آلوده به نفت منطقه ويژه اقتصادي انرژي پارس جداسازي شدند و سپس تجزيه كريزن در شرايط آزمايشگاهي و تاثير تغييرات غلظت آن بر رشد باكتري ها مورد ارزيابي قرار گرفت. روش كار: ابتدا نمونه ها را پس از صاف كردن، در محيط هاي حاوي تركيبات معدني و ماده هيدروكربني كريزن كشت داده و در 32 درجه سانتي گراد به مدت 14 روز انكوبه شدند. پس از جدا سازي باكتري ها، با استفاده از تست هاي مرسوم ميكروبيولوژيك و بيوشيميايي شناسايي آن ها انجام گرديد. جهت بررسي ميزان رشد باكتري هاي تجزيه كننده، دانسيته نوري (600OD) آن ها در غلظت هاي 1/0 تا 4/0 گرم بر ليتر كريزن مورد ارزيابي قرار گرفت. در نهايت با استفاده از دستگاه كروماتوگرافي، ميزان تجزيه و حذف كريزن توسط باكتري هاي جداشده مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: 4 باكتري سودوموناس پوتيدا، گونه‏هاي مايكوباكتريم، ميكروكوكوس واريانس و باسيلوس كوآگولانس جداسازي و شناسايي گرديدند. باكتري سودوموناس پوتيدا به عنوان قوي ترين باكتري در تجزيه كريزن شناخته شد. به طوري كه در حداقل زمان ممكن رشد نمود و دانسيته نوري آن در تمام غلظت هاي مورد آزمايش از بقيه باكتري ها بيشتر بدست آمد. اين باكتري توانست در طي 10 روز 95 درصد از كريزن با غلظت اوليه 1/. گرم بر ليتر را تجزيه و حذف نمايد. گونه‏هاي مايكوباكتريم در رده دوم از نظر قدرت تجزيه كريزن قرار گرفت. ضعيف ترين باكتري تجزيه‏كننده كريزن، باسيلوس كوآگولانس تعيين گرديد. اين باكتري پس از 10 روز 42 درصد از كريزن را تجزيه نمود. نتيجه گيري: سودوموناس پوتيدا بيشترين دانسيته نوري و تجزيه كريزن را به خود اختصاص داد. اين باكتري به دلايل مختلف از جمله حضور در شرايط محيطي مختلف و داشتن آنزيم هاي تجزيه كننده، توانايي حذف هيدروكربن هاي آروماتيك چند حلقه اي را دارد.

Background & Objectives: Polycyclic aromatic hydrocarbons due to their toxicity, carcinogenicity, and resistant to bacterial degradation are considered as one of the important environmental threatening factors. Chrysene is an aromatic compound with four rings. In this research chrysene degrading bacteria were isolated from oil contaminated soils in pars special economic energy zone. Degradation of chrysene in laboratory condition and the effect of different chrysene concentration on bacterial growth were investigated. Methods: After filtration of samples they were cultivated in culture medium containing inorganic compounds and chrysene and then incubated at 32°C for two weeks. Isolated bacteria were identified by common microbiological and biochemical tests. The rate of bacterial growth was evaluated by measuring optical density (OD 600) in presence of 0.1-0.4 g/l chrysene. Degradation and removal rate of chrysene by isolated bacteria was investigated using chromatography machine. Results: Four bacterial species; Pseudomonas putida, Mycobacterium sp, micrococcus varians and Bacillus coagulans were isolated and identified. Pseudomonas putida was the strongest bacteria for chrysene degradation. The bacterium grew in minimum possible time and its optical density was higher than other bacteria for all the concentrations tested. This bacterium degraded and removed 95% of chrysene with primary concentration of 0.1 g/l during 10 days. Mycobacterium sp was the second strongest bacterium for chrysene degradation. The weakest bacterium in chrysene degradation was Bacillus coagulans that degraded 42% of chrysene after 10 days. Conclusion: Pseudomonas putida had the highest optical density and degradation ability for chrysene. Due to different reasons such as presence at different environmental conditions and having degrading enzymes this bacterium has the ability to degrade and remove polycyclic aromatic hydrocarbons.