تعيين فركانس ناقلين آلفا تالاسمي در جمعيت داوطلب ازدواج استان تهران با روش‌هاي مولكولي

Frequency of alpha thalassemia carriers detected in Tehran premarriage screening using molecular techniques

چكيده سابقه و هدف توزيع آلفاتالاسمي در جمعيت‌هاي متفاوت بسيار متغير است. بسته به نوع ژنوتيپ، فنوتيپ‌هاي مختلفي قابل انتظار است. هدف از تحقيق حاضر، بررسي فراواني ناقلين آلفا تالاسمي در داوطلبين ازدواج بود. مواد و روش‌ها در يك مطالعه كاربردي، در مدت يك ماه از هشت مركز بهداشت واقع در شمال، جنوب، شرق و غرب شهر تهران بدون هيچ محدوديتي صرفاً بر اساس مراجعه افراد، 626 نمونه خون به آزمايشگاه ارسال شد. DNA تخليص و آزمايش‌هاي مولكولي انجام شد. به طور عمده از آزمايش‌هاي مولكولي Multiplex Gap PCR ، ARMS PCR و Sequencing استفاده گرديد. يافته‌ها حداقل يك نوع حذف در ژن آلفا گلوبين در 95 نفر تشخيص داده شد. بر اين اساس فراواني جهش‌هاي حذفي شايع در افراد مورد بررسي 83/19% بود(85/27-81/11 = 95% CI). تريپليكيشن در هيچ يك از نمونه‌ها يافت نشد. بر اساس بررسي‌هاي قبلي و با توجه به اين كه با روش Multiplex Gap PCR ، حدود 65% موارد داراي جهش در ژن آلفا گلوبين در افراد داراي 27 < MCH يا 80 < MCV قابل تشخيص مي باشد، به نظر مي‌رسد تعداد واقعي موارد داراي جهش در ژن آلفا گلوبين بيشتر از موارد يافته شده با روش فوق باشد. نتيجه‌گيري بر اساس اين تحقيق، در صورت تعميم نتيجه به دست آمده در اين مطالعه به جامعه و بر اساس مطالعه قبلي، به نظر مي‌رسد تعداد افراد داراي جهش در ژن آلفا گلوبين در افراد داراي 27 < MCH يا 80 < MCV حداقل 143 نفر و با فراواني 90/29% باشد(40/37-40/22 = 95% CI).

Abstract Background and Objectives Based on the previous researches performed in Iran and worldwide, there is a significant number of subjects carrying alpha-thalassemia gene defect. Therefore, we aimed to assess its frequency amongst a random population selected from premarriage couples who entered the national prevention program of B-thalassemia major at Tehran. Materials and Methods Blood samples were collected from 625 randomly selected individuals following obtaining written informed consent through eight cooperating primary health care centers (PHC) in Tehran. Primarily, CBC testing was performed. Subsequently, blood samples underwent DNA extraction and gene-specific amplification using ARMS PCR and Multiplex Gap PCR followed by DNA sequencing of negative samples to identify potentially missed alpha-globin gene mutations. Results According to CBC results, 147 individuals were considered normal; 479 remaining blood samples underwent molecular assessment which revealed that 95 samples possessed a minimum of one deletional mutation in the alpha-globin genes, resulting in a frequency of 19.83% in the tested population (CI 95%; 11.81-27.85). Furthermore, 50 samples with normal hematological indices (MCH > 27, MCV > 80) were tested for triplication mutation and revealed to be negative. Conclusions It has previously been established that Multiplex Gap PCR is capable of detecting 65% of alpha globin gene defects in blood samples with abnormally low hematological indices (MCH < 27, MCV < 80). Hence, using bio-informatic techniques with generalization of our results to the entire population of Tehran showed the true frequency of alpha-globin gene defect to be actually 29.90% (CI 95%; 22.40-37.40) at the population level.