اازريابي وارونگي اينترون 1 ژن فاكتور هشت انعقادي در بيماران هموفيلي A شديد با استفاده از روش( Inverse Shifting-PCR(IS-PCR در مراجعه كنندگان به بيمارستان سيدالشهدا اصفهان

Analysis of Intron 1 Inversion at F8 Gene in Severe Hemophilia A Patients by Inverse Shifting-PCR Referred from Isfahan Seyedolshohada Hospital

زمينه و هدف: هموفيلي A يك اختلال انعقادي وابسته به جنس مغلوب است كه در اثر وقوع ناهنجاري هاي گوناگون در ژن فاكتور هشت انعقادي حادث مي گردد. وارونگي اينترون 22 در50-45% ازموارد مسبب نوع شديد بيماري است. علاوه بر اين وارونگي اينترون 1 نيز در بيش از 5% موارد مسيول ايجاد هموفيلي A شديد محسوب مي گردد. هدف از اين مطالعه ارزيابي دقيق وارونگي اينترون1 ژن فاكتور هشت انعقادي با استفاده از روش(IS-PCR(Inverse Shifting-PCR در بيماران هموفيلي A شديد كه از نظر وارونگي اينترون 22 منفي بوده اند مي باشد. روش كار: در اين مطالعه تجربي، بيماران هموفيلي A شديد مراجعه كننده به بيمارستان سيدالشهدا اصفهان با كمتر از1% سطح نرمال فعاليت فاكتور هشت مورد بررسي قرار گرفتند. بعد از گرفتن رضايت نامه از بيماران، DNA ژنومي از لوكوسيت هاي خون محيطي استخراج شد. سپس وارونگي اينترون يك با تكنيك IS-PCR بررسي شد. يافته ها: 18بيمار از 32 بيمار كه فاقد وارونگي اينترون 22 بودند از نظر وجود يا عدم وجود وارونگي اينترون 1 به وسيله روش تشخيص مولكولي جديد PCR IS- مورد ارزيابي قرار گرفتندكه 2 بيمار (6.2%) از مجموع بيماران هموفيلي A شديد از نظر وجود اين وارونگي مثبت بودند. نتيجه گيري: نتايج به دست آمده در اين مطالعه، با شيوع اللي وارونگي اينترون يك در ساير مطالعات مشابه مطابقت دارد. IS-PCR روشي دقيق، سريع وكم هزينه بوده كه مي تواند تشخيص مولكولي وارونگي را ارتقا ببخشد و در ارزيابي افراد بيمار، ناقلين و تشخيص هاي پيش از تولد كاربرد دارد.

Background & Objectives: Hemophilia A is an X-linked recessive bleeding disorder, which is caused by several different abnormalities in Factor 8 gene .Intron 22 inversion is the main causative mutation in 45-50% of severe hemophilia A patients. Moreover intron 1 inversion is responsible for > 5% of severe hemophilia A cases. The goal of this study was to precisely analyse intron 1 inversion of Factor 8 gene in severe Hemophilia A patients who were negative for intron 22 inversion by Inverse Shifting-PCR (IS-PCR) method. Methods: In this experimental study, severe hemophilia A patients with less than 1% of normal FVIII activity level referred from Isfahan Seyedolshohada hospital were analyzed. After obtaining the consent from patients, genomic DNA from peripheral blood leukocytes was extracted. Then, Inverse-Shifting PCR method was exploited for detection of inversion of intron 1 of Factor 8 gene in patients who were negative for inversion intron 22. Results: In 18 out of 32 patients who were negative for inversion intron 22, 2 (6.2%) had intron 1 inversion. Conclusion: The allele frequency of inversion of intron 1 at Factor 8 gene is in agreement with related studies. IS-PCR is a rapid, robust and cost effective method that can improve the molecular detection of inversion and is useful for analysis of hemophilia A patients, carrier testing and prenatal diagnosis.