بررسي فعاليت ضدميكروبي اسانس و عصاره آبي و آلي برگ اكاليپتوس بر باكتري Pseudomonas tolaasii در شرايط In vitro و In vivo

Antimicrobial activity of essential oil and extracts of Eucalyptus camaldulensis Dehnh. on Pseudomonas tolaasii under In vitro & In vivo conditions

يكي از رويكردهاي نوين براي كنترل بيولوژيك بيماري لكه قهوه‌اي قارچ تكمه‌اي Pseudomonas tolaasii استفاده از اسانس‌هاي گياهيست. در اين ارتباط اثر ضدميكروبي اسانس و عصاره آبي و آلي حاصل از برگ گياه اكاليپتوس (Eucalyptus camaldulensis) بر روي باكتري مذكور در شرايط In vitro و In vivo مورد ارزيابي قرار گرفت. عصاره‌گيري از گياه با حلال‌هاي آب، متانول، استون و اتانول به روش ماسراسيون به مقدار 3/0گرم بر ميلي‌ليتر تهيه شد. استخراج اسانس از اندام هوايي با روش تقطير با آب (Hydro-distillation) انجام گرديد. روش بيوسنجش با اسانس در رقت‌هاي (بدون رقت، 1/0، 01/0، 001/0 و 0001/0 mg/ml) روي دو محيط كشت نوترينت آگار (NA) و كينگس B KB)) با ايجاد چاهك در شرايط آزمايشگاه صورت گرفت. با جداسازي و شناسايي اجزاي اصلي موجود در اسانس به‌وسيله دستگاه گاز كروماتوگراف (GC/MS) مشخص گرديد كه از بين تركيب‌هاي شناخته شده ضدميكروبي اسانس اكاليپتوس، دو تركيب 8،1-سينيول (1/58%) و آلفا-فلاندرن (6%) از درصد بالايي برخوردار بودند. در بررسي تاثير اسانس و عصاره اكاليپتوس مشخص گرديد كه اسانس خالص اكاليپتوس با تشكيل mm17 قطر هاله بازدارندگي روي محيط كشت KB و عصاره متانولي گياه فوق در محيط كشت NA با قطر هاله بازدارندگي mm8 به‌ترتيب داراي بيشترين اثر ضدباكتريايي عليه Pseudomonas tolaasii بودند كه در مقايسه با آنتي‌بيوتيك‌هاي اريترومايسين، پني‌سيلين و جنتامايسين در محدوده غلظت mg/ml1/0 و 01/0 قطر هاله عدم رشد بيشتر ولي در مقايسه با تتراسايكلين، عصاره متانولي قطر هاله كوچكتري را نشان داد. همچنين نسبت به آنتي‌بيوتيك‌هاي اريترومايسين و پني‌سيلين در غلظت‌هاي mg/ml10-5-1 قدرت مهاركنندگي اسانس و عصاره متانولي بيشتر ولي در مقايسه با آنتي‌بيوتيك‌هاي تتراسايكلين و جنتامايسين عصاره متانولي قدرت مهاركنندگي پايين‌تري را نشان داد. در آزمون مربوط به مديريت بيماري در شرايط In vivo، اسانس و عصاره متانولي اكاليپتوس در دو رقت mg/ml1/0 و 01/0 در مقايسه با نمونه تلقيح‌شده با باكتري داراي بازدارندگي بود. با اين تفاوت كه در رقت mg/ml1/0همزمان با گياه‌سوزي كلاهك قارچ خوراكي بود كه به‌ترتيب در اسانس و عصاره متانولي بيشتر بود، ولي در رقت mg/ml01/0گياه‌سوزي اسانس نسبت به عصاره متانولي خيلي كمتر مشاهده شد. بنابراين چنين به نظر مي‌رسد كه غلظت مطلوب براي مديريت اين بيماري براي اسانس اكاليپتوس رقت mg/ml01/0 مي‌باشد.

One of the modern methods for biological control of button mushroom (Agaricus bisporus) brown blotch disease is using plantʹs essential oil. Therefore, antimicrobial properties of essential oil and extracts obtained from Eucalyptus camaldulensis Dehnh. leaves were evaluated against the plant pathogenic bacterium Pseudomonas tolaasii both In vitro and In vivo conditions. 0.3 g/ml of each leaf samples was macerated in water and organic solvents (acetone, methanol and ethanol) to obtain the relevant extracts. The extraction of essential oil from leaves was performed Hydro-distillation method using Clevenger apparatus. Bioassays for inhibition activities of EO were carried out in five concentrations (0/1, 0/01, 0/001, 0/0001 and pure mg/ml) on two agar media of NA and KB. According to the isolation and identification of the main components in essential oils by gas chromatography (GC-MS), Cineol (58.1%) and ?-phellandrene (6%) were identified as the main components. The most efficient In vitro results obtained by pure essential oil of Eucalyptus with 17 mm inhibition zone on KB and methanol extract with 8mm on NA. These were more pronounced when compared to inhibition effects of antibiotics erythromycin, penicillin and gentamycin and not with tetracycline in both concentrations of 0.1 and 0.01 mg/ml. This was reversed by subsequent increase of the antibiotics tetracycline and gentamicin to the level of 1, 5 and 10 mg/ml. In vivo assays were conducted in order to evaluate the efficacy of essential oil and methanol extract in two dilutions of 0/1 and 0/01 mg/ml. 20µl of each plant extracts was pre-treated on mushroom caps and after 24 h, the bacterial suspension at ca 105 cfu/ml was inoculated the same pre-treated sites. After a two day incubation period at 25°C, the 0/01 concentration of both extracts showed a satisfactory result.