استاندارد سازي روش تشخيص مولكولي ژن entC استافيلوكوكوس آريوس جدا شده از عفونت‌هاي انساني و تعيين سكانس آن

Standardization of Molecular Diagnostic of the entC Staphylococcus Aureus Isolated from Human Infections and Determine its Sequence

هدف: هدف اين تحقيق استاندارد سازي روش تشخيص مولكولي ژن انتروتوكسين C استافيلوكوكوس آريوس مي‌باشد. مواد و روش‌ها: با استفاده از ژن استاندارد موجود در بانك ژن پرايمر طراحي گرديد، سپس روش مولكولي PCR جهت تشخيصentC در استافيلوكوكوس آريوس‌هاي جدا شده از نمونه‌هاي انساني (300 سويه جدا شده) set up گرديد. محصول PCR تعيين سكانس و با ژن استاندارد مقايسه شد. همچنين، توانايي توليد انتروتوكسين C در تمام سويه‌هاي ناقل ژن entC نيز با كيت اليزا بررسي گرديد. يافته‌ها: نتايج نشان داد، روش مولكولي PCR با پرايمرهاي مختلف به خوبي set up شده است. زيرا، با جفت پرايمر اول قطعه bp102 و با جفت پرايمر دوم قطعه bp1223 تكثير شد. نتايج مقايسه سكانس حاصل از باند bp1223 با ژن استاندارد انطباق 99 درصدي را نشان داد. ترجمه آنها وجود تنها اختلاف در جايگاه 218 يعني آلانين به جاي والين بود. همچنين، نتايج توكسين‌زايي سويه‌هاي ناقل ژن entC با آزمون اليزا حاكي از آن بود كه 37 درصد سويه‌هاي جدا شده از نمونه هاي باليني حاوي entC مي‌باشند. نتيجه گيري: علاوه، بر سويه‌هاي استافيلوكوكوس آريوس كواگولاز مثبت سويه‌هاي كواگولاز منفي نيز انتروتوكسين‌هاي سوپر آنتي‌ژن را توليد مي‌نمايند. تحقيق حاضر روشي ساده و سريع جهت تاييد توانايي توكسين‌زايي باكتري ارايه و تشخيص سويه‌هاي توليد كننده انتروتوكسين C را استاندارد سازي نموده است. زيرا، تشخيص انتروتوكسين‌هاي سوپرآنتي‌ژن مي‌تواند راهنماي با ارزشي جهت درمان مناسب و پيشگيري از عوارض بعدي آنها باشد.

Aim: The aim of this study was to standardize the molecular detection Staphylococcus aureus enterotoxin C gene method. Materials and Methods: Based on gene bank data, the PCR molecular method was set up for detection of entC gene in Staphylococcus aureus isolated from human subjects (300 isolated strains were assayed). The PCR Product was sequenced and were compared with the standard gene. By using the ELISA test, ability to produce enterotoxin C of all strains which hair born entC gene were evaluated and analyzed by ELISA kit. Results: The results showed that the molecular technique of PCR is well set up. Because, the first primer pair amplified a 102bp fragment and the second primer pair were amplified a 1223bp fragment with ease. Multiple Alignment the sequence of 1223bp fragment with the reference gene showed 99 percent compliance. They translated form shows only difference in position 218 which the alanine was replace the valine. Using ELISA test the toxigenicity of all strain containing entC gene was shown that the 37% of strains contained the entC gene. Conclusion: in addition of coagulase positive Staphylococcus aureus strains coagulase negative strains have ability to produce supperantigenic enterotoxins. This research provides a simple and quick confirmation and identification method of which capable detect enterotoxin C-producing strains and it has been standardized. Because of the diagnosis the supperantigens could represent valuable guide for proper treatment and prevention of complications of them.