شناسايي ساركوسيستيس تنلا و ساركوسيستيس آريتي كانيس جدا شده از گوسفندان كشتاري در كشتارگاه تبريز به وسيله روش‌هاي انگل‌شناسي و PCR-RFLP

Identification of sarcocystis tenella and sarcocystis arieticanis isolated from slaughtered sheep in Tabriz abattoir using parasitological and PCR-RFLP methods

ساركوسيستيس حدودا از 130 گونه هتروگزنوز تشكيل شده است كه از كوكسيدياهاي تشكيل دهنده كيست با چرخه زندگي و بيماريزايي متفاوت مي‌باشند. ساركوسيستوزيس بوسيله گونه هاي ساركوسيستيس ايجاد مي شود كه انگل هاي تك ياخته ي داخل سلولي بوده و متعلق به شاخه اپي كمپلكسا هستند. در اين مطالعه عضلات قلب و ديافراگم از 60 گوسفند كشتار شده در كشتارگاه تبريز جمع آوري شد. گونه هاي ميكروسكوپي ساركوسيستيس به وسيله تهيه گسترش مستقيم بافتي (Dob smear) از نمونه ها و رنگ آميزي آنها به وسيله ي رنگ گيمسا و هضم نمونه ها به وسيله ي پپسين و در نهايت سانتريفيوژ و تهيه گسترش از رسوب و رنگ آميزي آن با رنگ گيمسا و مشاهده برادي زوييتها در زير ميكروسكوپ تشخيص داده شدند. تخليص DNA با استفاده ازكيت صورت گرفت .شرايط PCR براي تكثير قطعه 18s rRNAفراهم شد. با توجه به محل جايگاه برش، آنزيم محدود كننده TAG1 انتخاب شد.كيستهاي ميكروسكوپي در 40 ? گسترش هاي بافتي و در 100 ? هضم بافتي مشاهده شدند. ارزيابي PCR-RFLP نشان داد كه كيستهاي ميكروسكوپي متعلق به ساركوسيستيس آريتي كنيس و ساركوسيستيس تنلا است. با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي توسط روش PCR-RFLP و آنزيم TAG1 مي توان گونه هاي ساركوسيستيس آريتي كنيس و ساركوسيستيس تنلا را به طور دقيق از هم تفكيك داد.

The genus sarcocystis is composed about 130 species of Heteroxenous cyst-forming coccidia with differences in life cycle and pathogenicity. Sarcocystosis is caused by species of Sarcocystis, an intracellular protozoan parasite in the phylum Apicomplexa. In this study, heart and diaphragm muscles of 60 sheep collected from Tabriz abattoir. Microscopic cysts identified by preparation of direct tissue impression smears from samples and staining them by giemsa stain and digestion of samples by pepsin and finally centrifugation and preparation of smear from the sediment and staining them with Giemsa stain and microscopically examined for presence of braddyzoit. DNA extraction carried out by a kit. PCR conditions optimized for 18S rRNA amplification. According to the position of restriction sites, restricted enzymes TAG1 selected. We observed the microscopic cysts in 40 % of impression smears and 100% of tissue digestions. RFLP-PCR analysis showed that microscopic cysts belonged to Sarcocystis arieticanis and Sarcocystis tenella. Sarcocystis species can be correctly recognized through PCR-RFLP technique using the designed specific primers and TAG1 enzyme.