كلون كردن ژن پروكيموزين در باكتري لاكتوكوكوس لاكتيس

Cloning of prochymosin gene in lactococcus lactis bacteria

در سال هاي اخير از يك طرف به دليل افزايش حجم توليد شير در جهان و از طرف ديگر به خاطر كاهش منابع طبيعي آنزيم رنين، توليد پنير با استفاده از اين آنزيم كاهش چشمگيري داشته است. تلاش‌هاي زيادي براي توليد اين آنزيم به شكل نوتركيب صورت گرفته است. باكتري لاكتوكوكوس لاكتيس استارتر طبيعي پنير محسوب مي‌شود و توليد پروكيموزين توسط اين باكتري تحول بزرگي در صنعت شير ايجاد خواهد كرد. در اين پژوهش تلاش بر اين بوده است كه ژن توليد كننده‌ي پروكيموزين بزي در باكتري لاكتوكوكس لاكتيس كلون گردد. براي اين كار ژن پروكيموزين كه قبلاً در پلاسميد28 pET- و در باكتريE. coli سويه BL21(DE3) كلون شده بود، توسط واكنشPCR تكثير و پس از جداسازي ژن در پلاسميد واسطpTZ57R كلون و براي نگهداري بهتر به باكتريE. coli GM2163 منتقل شد. سپس ژن پروكيموزين از پلاسميدpTZ57R بريده، در پلاسميد لاكتوباكترياييpNG-410 كلون و براي تكثير پلاسميد كلون شده به باكتري E.coli MC1061 منتقل شد. بعد از تكثير، پلاسميدpNG-410 حامل ژن پروكيموزين از باكتريE. coli MC1061 جدا و به باكتري لاكتوكوكوس لاكتيس سويهNZ9000 منتقل گرديد. كلون‌هاي به دست آمده توالي يابي و از صحت ژن مورد نظر اطمينان حاصل شد.