شناسايي ژنوتيپ ايزوله‌هاي كيست هيداتيك در استان زنجان با استفاده از روش PCR-RFLP

Genotype Characterization of Hydatid Cysts Isolated from Zanjan Using PCR-RFLP Technique

زمينه و هدف: بيماري كيست هيداتيك يكي از مهم‌ترين بيماري‌هاي مشترك بين انسان و دام در بسياري از نقاط دنيا است كه توسط مرحله‌ي لاروي اكينوكوكوس گرانولوزوس اتفاق مي‌افتد. شناسايي ژنوتيپ‌هاي مختلف ايزوله‌هاي انگل، ميزبانان مرتبط و مسيرهاي انتقال آن‌ها حايز اهميت است. تاكنون تعداد 10 ژنوتيپ مختلف (G1-G10) بر پايه‌ي آناليز ماركرهاي ژنتيكي هسته و ميتوكندري در مناطقي از جهان و ايران توصيف شده است. اين مطالعه با هدف تعيين ژنوتيپ ‌ايزوله‌هاي حيواني و انساني كيست هيداتيك در استان زنجان انجام شد. روش بررسي: تعداد 86 نمونه شامل 49 نمونه‌ي گوسفندي، 28 نمونه‌ي گاوي از كشتارگاه و 9 نمونه‌ي انساني كيست هيداتيك از بيمارستان‌هاي استان زنجان جمع‌آوري شد. پس از استخراج DNA ژنومي، ناحيه rDNA-ITS1 توسط PCR تكثير و محصول به‌دست آمده با روش PCR-RFLPآناليز گرديد. يافته‌ها: اندازه‌ي قطعه‌ي ITS1 تكثير يافته حدود bp 1000 به‌دست آمد. الگوهاي قطعات به‌دست آمده از محصول PCR ناحيه rDNA-ITS1 بعد از برش با آنزيم‌هاي Msp1, Rsa1, Alu1 وTaq1 نشان داد كه تمامي نمونه‌ها منطبق با استرين شايع گوسفندي هستند. نتيجه‌گيري: در اين منطقه، استرين غالب اكينوكوكوس گرانولوزوس در دام‌ها و انسان همانند ساير مناطق مطالعه شده‌ي ايران، ژنوتيپ G1 يا همان استرين شايع گوسفندي است. واژگان كليدي: كيست هيداتيك، ژنوتيپ، PCR-RFLP ، زنجان

Background and Objective: Hydatidosis is one of the most important zoonoses caused by larval stage of Echinococcus granulosous which is distributed worldwide. Determination of the parasite genotypes in relation to the host specificity and transmission routes is of great importance. So far, DNA based analysis of the isolates obtained from different host species has lead to identification of 10 different genotypes (G1-G10) in the world endemic areas. This work was designed to identify the genotypes of the hydatid cysts isolated from domestic animals and people in Zanjan. Materials and Methods: A total of 86 isolates, including 49 sheep, 28 cattle isolates collected from the slaughter houses, and 9 human isolates collected from hospitals were subjected to genotype analysis using PCR-RFLP of the ribosomal DNA ITS1 region. Results: A fragment of about 1000 bp was amplified from all samples using ITS1 PCR. The endonuclease digestion of the PCR products resulted in the RFLP pattern that were the same for all isolates as the pattern expected for the sheep strain. The restriction patterns of all 4 enzymes used ( Alu I, TaqI, RsaI, and Msp I), consistently approved the same genotype. Conclusion: The PCR RFLP pattern obtained from our samples were characterizes as E. granulosous sensu stricto, which is the same as what has been previously reported in Iran. It can be concluded that the hydatid cyst isolates in our study area, Zanjan, is basically similar to that of other endemic areas of Iran. Keywords: Hydatid cyst, Genotype, PCR-RFLP, Zanjan