جداسازي و شناسايي مولكولي يك Acinetobacter sp. مقاوم به آنتي بيوتيك از فاضلاب بيمارستاني و بررسي الگوي پلاسميدي آن

Background: The emergence of antimicrobial-resistant genes and the indiscriminate use of antibiotics contribute to the dissemination of resistant pathogens in the environment. The objective of the pr

سابقه و هدف: ظهور ژن هاي مقاوم به عوامل ضد ميكروبي و استفاده بي رويه از آنتي بيوتيك ها منجر به انتشار باكتري هاي مقاوم به چند دارو در محيط مي شود. هدف از اين مطالعه، جداسازي و شناسايي مولكولي باكتري هاي مقاوم به آنتي بيوتيك از فاضلاب هاي بيمارستاني و بررسي نقش پلاسميد در ايجاد مقاومت بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي، مقاومت آنتي بيوتيكي سويه هاي جدا شده از فاضلاب بيمارستاني با روش ديسك ديفيوژن بررسي شد. شناسايي با روش برگي ((Bergey و مطالعات فيلوژنتيك بر مبناي توالي ژن 16S rRNA انجام شد. استخراج پلاسميد با روش ليز قليايي و آزمايش كيورينگ پلاسميد (Plasmid curing) با اتيديوم برومايد انجام شد. يافته ها: 10 سويه از فاضلاب هاي بيمارستاني جدا شد. در تمام سويه ها مقاومت چند دارويي مشاهده گرديد. يكي از سويه ها (ST1) نسبت به تمام آنتي بيوتيك هاي مورد آزمايش مقاوم بود. مطالعات فيلوژنتيك نشان داد كه سويه ST1 متعلق به جنس Acinetobacter بوده و نزديك ترين خويشاوند آن Acinetobacter baumanni IARI-V-4 است. سويه فوق Acinetobacter sp. HM_C ناميده شد و توالي نوكليوتيدي آن در GenBank ثبت شد. تيمار سويه ST1 با اتيديوم برومايد منجر به حذف پلاسميدها و در نهايت از دست رفتن مقاومت به آميكاسين و جنتامايسين شد. نتايج نشان داد كه ژن هاي مقاومت به آميكاسين و جنتاميسين در اين سويه بر روي پلاسميد قرار دارند. نتيجه گيري: فاضلاب بيمارستاني عاملي مهم در انتشار باكتري هاي مقاوم چند آنتي بيوتيكي و ژن هاي مقاومت است.

Background: The emergence of antimicrobial-resistant genes and the indiscriminate use of antibiotics contribute to the dissemination of resistant pathogens in the environment. The objective of the present study was isolation and molecular identification of antibiotic resistant bacteria from the hospital sewage and investigation of the role of plasmid in resistance mechanism. Materials and Methods: In this experimental study, the antibiotic resistance patterns of the isolated strains from hospital effluent samples were assayed by disc diffusion method. The selected isolate was identified by morphological and biochemical methods in accordance with Bergeyʹs Manual of Systematic Bacteriology. Phylogenetic analysis was performed based on 16S rRNA gene sequences. Plasmid extraction was carried out by alkaline lysis technique and curing of plasmids performed by Ethidium bromide. Results: Ten bacterial strains were isolated from hospital sewage. Results of antibiotic susceptibility test showed that all of the isolates were multi-drug resistant. One of the isolates (ST1) was resistant to all of the tested antibiotics. Phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene sequences indicated that the isolate belongs to the genus Acinetobacter then designated as Acinetobacter sp. HM_C. Phylogenetically the closest relative of strain was Acinetobacter baumanni IARI-V-4. Curing experiments by Ethidium bromide caused the elimination of all plasmids. The sensitivity of the plasmid cured ST1 to gentamycin, and amikacin indicated that the genes encoding resistance to gentamycin, and amikacin were located on plasmid. Conclusion: Hospital effluents are important materials in dissemination of multidrug resistant bacteria and their resistant genes into the environment.