استفاده از اتانول و دماي پايين در جداسازي آلبومين از پلاسماي انساني

Separation of Albumin from the Human Plasma by Ethanol and Low Temperature

زمينه و هدف: پلاسماي انساني منشا پروتيين‌ها و آنزيم‌هاي متفاوتي مي‌باشد كه داراي اثرات دارويي متفاوتي مي‌باشند. از اين داروها مي‌توان فاكتورهاي انعقادي هشت و نه، ايمونوگلوبولين‌ها، و آلبومين را نام برد. آلبومين داراي مولكولي زنجيره‌اي با 585 آمينو اسيد مي‌باشد. آلبومين داراي 17 پل دي سولفيدي مي‌باشد كه ايجاد يك پروتيين كروي پايدار مي‌نمايد. وزن مولكولي آلبومين حدود 66500 دالتون مي‌باشد كه حدود 80 درصد فشار انكوتيك خون را سبب مي‌شود. هدف از اين مطالعه، تهيه‌ي آلبومين از پلاسماي انساني با استفاده از اتانول و دماي پايين بوده است. روش بررسي: در اين مطالعه پلاسماي مورد استفاده از نوع FFP و اتانول مصرفي از نوع تجاري با خلوص 94 تا 96 درصد ‌بود. مواد شيميايي مصرفي شامل سديم هيدروكسايد، سديم كلرايد، اكتانوييك اسيد Analytical Grade و از شركت مرك بود. در اين مطالعه جداسازي آلبومين از پلاسماي انساني با استفاده از اتانول در دماي پايين صورت پذيرفت. با تنظيم پارامترهايي از قبيل pH ، درجه حرارت، و درصد غلظت الكل در شرايط مختلف اجزاي مختلف خوني از پلاسما جدا گرديد كه شامل قسمت‌هاي يك تا پنج ‌بود. هر كدام از اين اجزا مي‌تواند منبع خوبي جهت جداسازي پروتيين‌ها و آنزيم‌ها در مراحل بعدي باشد. جز اول منبع خوبي براي فيبرينوژن و فاكتور هشت انعقادي، جز دوم مناسب براي تهيه‌ي ايمونوگلوبولين‌ها و در نهايت جز پنجم منبع بسيار مناسب جهت تهيه‌ي آلبومين ‌بود. يافته‌ها: در اين مطالعه آلبومين با دو غلظت پنج و بيست درصد تهيه گرديد و مقايسه‌ي كيفيت در دو غلظت حكايت از خلوص بيش از 95 درصد داشت. در تهيه‌ي آلبومين با غلظت 5 درصد راندمان 71 درصد و در تهيه‌ي آلبومين با غلظت 20 درصد راندمان 5/75 درصد به‌دست آمد. نتيجه‌گيري: آلبومين تهيه شده خلوص بيش از 95 درصد را نشان داد و ميزان پليمر آن كمتر از 5 درصد بود. در تهيه‌ي آلبومين 5 درصد مي‌توان از غلظت پايين‌تر پايدار كننده‌ي سديم كاپريلات استفاده نمود و همچنين در فرمولاسيون نشان داده شده كه فرآيند تهيه را مي‌توان با pH حدود7/4 به‌جاي 5/6 شروع نمود، زيرا امكان آلودگي كاهش مي‌يابد. واژگان كليدي: خالص سازي، پلاسماي انساني، پروتيين، آلبومين

Background and Objective: Human plasma is a suitable source for different proteins and enzymes with a variety of therapeutic effects. Examples include coagulation factors VIII and IX, immunoglobulin, and albumin, which consists of a 585 amino-acid chain, weighing 66.5 kD. Albumin molecule also has 17 di-sulfide bridges which form a stable spherical protein structure, which it cause of 80% of oncotic blood pressure. The aim of this study was to separate albumin from the human plasma by using ethanol at low temperature. Materials and Methods: Fresh frozen plasma was used as the starting material. In this study, albumin was separated from human plasma by using ethanol (commercial grade with 94-96% purity) in low temperature. By adjustment of different parameters such as pH, temperature, and concentration of alcohol, different factions of plasma can be separated which are from fraction I to fraction V. Fraction I is a good source for fibrinogen and coagulation factor VIII preparation, fraction II is suitable for preparation of immunoglobulin, and fraction V is a good source for albumin preparation. Results: Albumin was prepared with 5 and 20 percent concentrations. Quality comparison of the two concentrations showed a purity of more than 95%. The average yields of the 5 % and 20 % albumin preparations were 71% and 75.5%, respectively. Conclusion: Our data show that the produced albumin has a purity of higher than 95% and contains less than 5% polymer. In preparation of 5 % albumin, it is possible to use lower concentrations of sodium caprylate as stabilizer. It has also been shown in the formulation that the preparation process can be started at the acidic pH of 4.7, instead of 6.5, in order to avoid bacterial contamination. Keywords: Purification, Human plasma, Protein, Albumin