جداسازي و غربالگري اكتينوميست ها ازخاك هاي جنگلي استان گلستان و بررسي خواص ضد باكتريايي آن ها

Isolation, screening and survey of anti-bacterial properties actinomycetes from soils of Golestan province

اكتينوميست ها باكتري هاي گرم مثبت و با GC% بزرگتر از 55 در DNA خودشان مي باشند. اكتينوميست ها ابتدا به عنوان گروه حد واسط بين قارچ و باكتري در نظر گرفته مي شدند، اما امروزه جز ارگانيزم هاي پروكاريوتيك به حساب مي آيند. هدف از اين تحقيق جداسازي، غربالگري و بررسي خواص ضد باكتريايي اكتينوميست ها سويه هاي استاندارد Staphylococcus aureus PTCC 1113, ، Klebsiella pneumoniae PTCC1402 Bacillus subtilis PTCC:1365 , و Salmonella typhi PTCC 1609 و تعيين رابطه بين رطوبت و pH خاك با ميزان پراكندگي اين باكتري ها بوده است .در اين مطالعه براي جداسازي اكتينوميست ها از محيط Starch Casein Agar(SCA) و به منظور غربالگري اوليه از روش تلقيح نقطه اي (spot) و براي توليد آنتي بيوتيك در روش غوطه ور (submerge)، از محيط(ISP2) International Streptomyces Project 2 استفاده شده و در نهايت روش انتشار چاهك در پليت به منظور غربالگري نهايي و آزمايش تعيين حساسيت آنتي بيوتيك بكار برده شد. در اين بررسي 30 نمونه خاك از نقاط مختلف جنگل گلستان جمع آوري شده و 50 سويه اكتينوميست از اين خاك ها ايزوله و خا لص سازي شد. سپس با استفاده از روش تلقيح نقطه اي 15 (%30) سويه اكتينوميست عليه باكتري هاي مورد آزمايش فعاليت ضدباكتريايي خوبي نشان دادند و 35 (70%) ايزوله داراي فعاليت ضدباكتريايي نبودند. در ادامه كار با انجام كشت غوطه ور در محيط مايع ISP2 و غربالگري نهايي ايزوله هاي اكتينوميست با استفاده از روش انتشار چاهك 5 (10 % ) ايزوله هاي 17 Gs، Gs19 ،21 Gs، 23 Gs و 25 Gs داراي بهترين فعاليت ضدباكتريايي عليه باكتري هاي مورد آزمايش بودند. هم چنين در روش انتشار چاهك 6% ايزوله هاي بر روي باكتري هاي گرم مثبت و هم چنين مجموع باكتري هاي گرم مثبت و گرم منفي و10% عليه باكتري هاي گرم منفي فعاليت ضد باكتريايي نشان دادند. هم چنين بين رطوبت و pH خاك با تعداد كلني ايزوله شده از آن رابطه معني داري وجود داشت.

Actinomycetes are gram positive bacteria with high GC percent of 57—75%. Actinomycetes were initially considered an intermediate group between bacteria and fungi, but are recognized as prokaryotic now.The aim of this study was isolation ،screening and determination of anti-bacterial properties isolates against standard strains including Salmonella typhi PTCC:1609, Staphylococcus aureus PTCC:1113, Klebsiella pneumoniae PTCC:1402 , Bacillus subtilis PTCC:1365 and also investigating relationship between soil moisture and pH with distribution of these bacteria. In this study, we used for isolation of actinomycetes, Starch Casein Agar )SCA( medium and for primary screening, spot inoculation method. Then in submerge method for production of antibiotic, International streptomyces project 2)ISP2( medium was used.Then,well diffusion method to final screening and antibiotic susceptibility test were applied. In this study, 30 soil samples collected from different parts of Golestan forest and isolated 50 strains of actinomycete from these soils. Then by using spot inoculation method, 15 (30%) isolates of actinomycetes showed good antibacterial activity against tested bacteria and 35 (70%) isolates had not antibacterial activity. Then by using submerge culture method in ISP2 broth and by final screening of isolates by method of well diffusion, 5 (10%) isolates including Gs17, Gs19, Gs21, Gs23 and Gs25 showed best antibacterial activity against the tested bacteria, respectively. In well diffusion method 6% of isolates showed antibacterial activity against gram positive bacteria and also total gram-positive and gram-negative bacteria and 10% of isolates showed antibacterial activity against gram-negative bacteria. We also found a significant relationship between soil moisture and pH with isolation frequency.