شناسايي جدايه هايCercospora beticola عامل بيماري لكه برگي سركوسپورايي چغندرقند با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي*

IDENTIFICATION OF Cercospora beticola ISOLATES, THE CAUSAL AGENT OF CERCOSPORA LEAF SPOT DISEASE OF SUGAR BEET, USING SPECIES-SPECIFIC PRIMERS

لكه برگي سركوسپورايي چغندرقند با عامل Cercospora beticola يكي از مهم ترين بيماري هاي اندام هاي هوايي چغندرقند مي‌باشد. با توجه به مشكلات موجود در شناسايي گونه هاي مختلف Cercospora بر اساس خصوصيات ريخت شناسي، در اين تحقيق دو مجموعه آغازگرهاي اختصاصي طراحي شده بر اساس توالي ژن كالمودولين و اكتين جهت تشخيص مولكولي اين‌گونه مورد استفاده واقع شد. براي اين منظور جدايه هاي استاندارد C. beticola همراه با ديگر جدايه هاي اين گونه كه از گياهان چغندرقند جداسازي شدند، مورد استفاده قرار گرفتند. كارايي اين آغازگرها روي جدايه هاي Cercospora جمع‌آوري شده از علف هاي هرز نيز ارزيابي گرديد. جفت آغازگر طراحي شده بر اساس توالي ژن اكتين قادر به تشخيص اختصاصي C. beticolaاز ديگر گونه هاي اين جنس و ديگر گروه هاي قارچي نبود. آغازگرهاي مبتني بر ژن كالمودولين قطعه اي به طول 234 جفت باز از تمامي جدايه هاي Cercospora و قطعه‌اي به طول 176 جفت باز را به صورت اختصاصي از جدايه هاي C. beticola تكثير و با موفقيت گونه C. beticola را از ديگر گونه هاي اين جنس تفكيك نمودند. بنابراين از اين مجموعه آغازگر مي توان براي غربال كردن گونه C. beticola از ديگر گونه هاي اين جنس و رديابي و تعيين دامنه ميزباني گونه C. beticola استفاده نمود.

Cercospora leaf spot, caused by Cercospora beticola, is one of the most important foliar diseases of sugar beet. Due to the problems associated with traditional methods in the identification of Cercospora species, in the present study two sets of previously designed Cercospora beticola-specific primers based on calmodulin and actin genes were used for the molecular identification of C. beticola isolates. For this purpose, two standard isolates of C. beticola together with the other isolates recovered from sugar beet plants with leaf spot disease symptoms in present study were subjected to PCR amplification. Efficacy of primer sets were tested on the Cercospora isolates recovered from weed plants with leaf spot symptoms, in present study. Our results showed that the primer set based on actin gene amplified a 959 bp PCR product from the all of the isolates tested in this study. This primer set failed to distinguish C. beticola from the other Cercospora spp. isolated from weeds as well as other fungal groups. The results of multiplex PCR assay using primer sets based on calmodulin gene yielded 234 bp PCR product from all of the Cercospora spp. tested in this study and only a 176 bp PCR product from C. beticola isolates; such that successfully discriminated C. beticola from the other Cercospora isolates. The calmodulin genes primer sets can be used for the screening of Cercospora beticola from the other Cercospora spp. and for the detection and the determination of the host range of Cercospora beticola as well.