تخليص فا كتور فعال كننده V انعقاد خون از زهر افعي لبتيناي ايران

Purification of Blood Coagulation Factor V Activator from the Venom of Iranian Vipera lebetina

زمينه و هدف: زهر مارهاي ويپريده (افعي ها) حاوي پروتيين هايي مي باشند كه روي انعقاد خون اثر مي گذارند. هدف از اين مطالعه، تشخيص و جداسازي فعال كننده فاكتور خوني انعقادي V از زهر افعي لبتيناي ايران مي باشد. روش بررسي: فعال كننده فاكتور V از 200 ميلي گرم زهر خام به وسيله سه مرحله كروماتوگرافي: ژل فيلتراسيون روي سفادكس G100، كروماتوگرافي تعويض يون روي DEAE – سلولز و كروماتوگرافي ميل تركيبي روي هپارين آگاروز تخليص شد. اثر فعال كننده فاكتور V روي فاكتور V انساني به وسيله فعاليت اميدوليتيك ترومبين توليد شده به وسيله فاكتور V فعال شده ((Va بررسي شد. يافته ها: فعال كننده فاكتور V تخليص شده يك باند پروتييني را به وسيله الكتروفورز روي سديم دودسيل سولفات ژل الكتروفورز ( (SDS - PAGE نشان داد. وزن مولكولي آن در حدود kDa 29 تخمين زده شد. اين فاكتور، در حضور يون كلسيم فاكتور V را به فاكتور Va تبديل مي كند. فعاليت ارژينين استرهيدرولازي روي سوبستراي N )BAEE - بنزوييل ارژينين اتيل استر) دارد. فعاليت اميدوليتيك ضعيفي روي سوبستراي S-2222 (بنزوييل – ايزولوسيل- گلوتاميل - گليسيل - ارژينيل پارانيتروانيليد ) نشان مي دهد. نتيجه گيري: با توجه به نتايج به دست آمده به نظر مي رسد كه فاكتور تخليص شده براي فاكتور V اختصاصي مي باشد.

Background and Objective: The venom of many Viperidae snake appear to contain proteins that affect blood coagulation. The aim of this study was to identify and isolate a blood coagulation factor V activator present in the venom from Vipera lebetina. Material and Methods: Factor V activator was purified from 200 mg of crude venom by three steps of chromatorgraphy which included: gel filtration on sephadex G100, Ion exchange chromatography on DEAE and cellulose and affinity chromatography on heparin agarose. The effect of factor V activator on human factor V was studied by measuring the amidiolytic activity of the produced thrombin by activated factor V (Va). Results: The results of SDS – PAGE identified an activator of factor V as a single protein band with a molecular weight of 29 KDa. This compound was converted, in the presence of calcium ions, to active factor Va. It also had arginine esterase activity toward substrate BAEE ( -benzoyl arginine ethyester) and a weak amidase activity on S-2222 (benzoyl- le-glu-Gly-Arg-p- nitroanilide). Conclusion: The results of this study showed that the isolated factor is a specific activator on factor V.