تهيه cDNA از mRNA ژن OD1 استخراج شده از بافت غده زهري عقرب ايراني ادونتوبوتوس دوريه (Odonthobuthus doriae)

mRNA Extraction from Venom Glands of Iranian Scorpion Odonthobuthus Doriae, cDNA Synthesis and Perfom PCR from OD1 by Means of Degenerative Primers

زمينه و هدف: در اكثر نقاط ايران، به ويژه مناطق مركزي، جنوب و شمال شرقي، عقرب زدگي يك مشكل بهداشتي جدي محسوب مي شود. بيشتر اين گزش ها، ناشي از عقرب‌هاي خانواده بوتيده (Buthidae Family) مي‌باشد. زهر عقرب داراي تركيبات فعال بيولوژيك مختلف از جمله سموم عصبي (نروتوكسين) مي‌باشد كه هر كدام توسط ژن مخصوص به خود كد مي‌شوند. هدف از انجام اين پژوهش تكثير cDNA كد كننده يك نروتوكسين شبه آلفا به نام OD1 از غده زهر عقرب ايراني ادونتوبوتوس دوريه (Odonthobuthus doriae) مي‌باشد. روش بررسي: نمونه هاي عقرب از آزمايشگاه رفرانس عقرب موسسه رازي كرج تهيه و شناسايي شدند. با استفاده از كيت استخراج RNA، مجموع RNA از غده زهري عقرب استخراج شد. پس از اين مرحله، ساخت cDNA از RNA استخراجي انجام شد. به منظور تكثير cDNA كد كننده نوروتوكسين، آغازگرهاي مناسب طراحي و تهيه شد. پس از بهينه سازي شرايط PCR، و با استفاده از تكنيك نسخه يرداري معكوس (RT-PCR )، قطعه cDNA كد كننده سم عصبي OD1 با 64 اسيد آمينه تكثير شد. يافته ها: با استفاده از كيت هاي استخراج و تكنيك RT-PCR، قطعه cDNA از غده زهر عقرب ادونتوبوتوس دوريه تكثير يافت. cDNA به دست آمده جهت انجام كلونينگ بعدي در نظر گرفته شد. باند مورد نظر مربوط به ژن OD1 با طول 195 bp بر روي ژل آگارز شناسايي شد. اين باند شامل 264 base pair كد كننده سم عصبي OD1 مي باشد.. نتيجه گيري: ترتيب اسيد آمينه قابل پيش بيني اين سم شامل 88 اسيد آمينه مي باشد كه شامل يك سيگنال پپتيد با 24 اسيد آمينه و سم OD1 كامل با 64 اسيد آمينه مي باشد.

Background and Objective: Scorpion sting is a serious public health problem in different parts of Iran. The majority of the scorpion sting cases are due to Buthidae family. Scorpion toxin consists of different biologic active components which are encoded by individual gene. The aim of this study was to amplify of cDNA encoding a ?-like neurotoxin, named OD1 from the venom gland of Iranian scorpion Odonthobuthus doriae. Materials and Methods: the identified Odonthobuthus doriae scorpions were prepared from the Razi vaccine and serum research institute that located in Hesarak, Karaj. The total mRNA was prepared and purified from the venom gland by using RNA extraction kit. The cDNA library was then constructed using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. Results: After optimizing PCR conditions, a cDNA encoding ?-like neurotoxin, named as OD1, was selectively amplified by PCR. Using degenerate and appropriate primers, an open reading frame of 264 base pair encoding the mature toxin with 64 residues was amplified from a cDNA library of Odonthobuthus doriae venom gland. Conclusion: The predicted amino acid sequence consist of 88 amino acid residues including a putative signal peptide of 24 residues and a mature toxin of 64 residues.