بررسي خنثي كنندگي آنتي‌ونوم انستيتو رازي بر خصوصيات بيولوژيك مار ويپرا لبتيناي ايراني

Neutralization effects of Iranian Vipera lebetina biological properties by Razi institute antivenom

زمينه: عوامل هموتوكسيك و نوروتوكسيك موجود در ونوم مار مي‌تواند سبب نكروز و از بين رفتن بافت گردد. مارگزيدگي در نقاط روستايي ايران در تمامي استان‌ها شايع بوده و مي‌تواند باعث ادم، نكروز بافت و تغييرات خوني (در صورت وجود عامل هموتوكسيك) گردد. قدرت ونوم گرزه مار (ويپرا لبتينا) ايراني در ايجاد تاثيرات موضعي هموراژيك و ادماتوز در رت و نيز پروكواگولانت به‌همراه توان خنثي نمودن موارد فوق به كمك آنتي‌ونوم پلي والانت آماده شده انستيتورازي به دو صورت انكوباسيون با ونوم قبل از تزريق و نيز در مطالعات خارج از بدن مورد بررسي قرار گرفتند. مواد و روش‌ها: دوزهاي افزاينده ونوم ويپرا لبتينا (2، 5 و 50 ميكروگرم در ميلي‌ليتر) به‌صورت زير پوستي به سطح پشتي گروه‌هاي سه‎گانه رت جهت اندازه‌گيري ميزان متوسط دوز هموراژيك زده شد. در آزمايش ديگر جهت تعيين قدرت ادماتوژنيك مقادير متفاوت ونوم (10 تا 150ميكروگرم) به‌صورت زير پوستي (100 ميكروليتر) به پاي راست گروه‌هاي سه گانه رت زده شد و جهت كنترل از مقدار مساوي نرمال سالين در پاي چپ استفاده گرديد. جهت تعيين زمان انعقاد مقادير مختلف از ونوم حل شده در 50 ميكروليتر از نرمال سالين به 200 ميكروليتر از پلاسماي انساني اضافه شده و زمان انعقاد اندازه‌گيري شد. آنتي ونوم انستيتو رازي در كليه آزمايشات فوق جهت خنثي‌سازي به‌كار برده شد. يافته‌ها: در بررسي حداقل دوز هموراژيك، پروكواگولانت و ميزاني كه مي‌توانست ادم را در كف پاي رت به‌ميزان 30 درصد افزايش دهد مقادير ?/8، 1/1 و70 ميكروگرم مشاهده گرديد كه بيانگر تاثيرات باليني متفاوت اين ونوم بود. با انكوباسيون ونوم و آنتي‎ونوم (30 و200 ميكروليتر) قبل از تزريق، تاثيرات هموراژيك و پروكواگولانت از بين رفت و ويژگي‌هاي ادماتوزنيز با دوزهاي افزايش يابنده آنتي‌ونوم كم‎ اثر شد. تزريق داخل پريتونيال آنتي‌ونوم نقش موثري در كاهش عوارض هموراژيك و ادماتوز در رت نداشت. تزريق دوزهاي بالاتر ونوم به‌صورت داخل عضلاني با تاثيرات ميونكروتيك همراهي داشت. نتيجه‌گيري: بررسي كنوني، نشان دهنده قدرت آنتي‌ونوم انستيتو رازي در خنثي نمودن تاثيرات هموراژيك و ادماتوز در محيط داخلي بدن و نيز لخته‌كنندگي در محيط آزمايشگاه بود. با توجه به وجود آنزيم‌هاي متعدد در ونوم مار ويپرا لبتينا لزوم انجام آزمايش‌هاي ديگر جهت بررسي آن‌ها به‌منظور تخليص و جداسازي و نيز ارزيابي قدرت خنثي‌كنندگي آنتي‌ونوم انستيتو رازي الزامي است.

Background: The hemotoxic and neurotoxic factors of snake venoms is the main responsible for necrosis and tissue sloughing. Envenomations are common in rural areas in all provinces of Iran caused by snake species which causes local swelling, ecchymosis and alterations in blood profile in case of hemotoxic venom. In this study some in vivo and in vitro properties (Hemorrhagic, edematogenic and coagualant) of Iranian Vipera lebetina venom in addition to neutralizing capacity of pepsin derived Razi Institute polyvalent antivenin were assayed. Material and Methods: Escalating doses of Vipera lebetina venom dissolved in Normal saline (2.5-50 µg/ml) were injected (100µl) subcutaneously to dorsal area of rats (n=3) to investigate mean hemorrhagic amount after 24 hours.Groups of three mice were injected subcutaneously in the right foodpad with various amounts of venom (10-150µg).The left foodpad received the same amount (100µl) ofnormal saline alone (negative control) to evaluate the edematogenic property of this venom. To determine the coagulant activity, various amounts of venom dissolved in normal saline (50µl) were added to human plasma (200µl) and coagulation time was measured. Razi Institute antivenom was used for neutralization of all three measured biological parameters. Results: Mean hemorrhagic, procoagulant and edematous amounts (increasing 30% in hind paw edema) were 8.5, 1.1 and 70 microgram, respectively. Preincubation with polyvalent antibody (30 and 200 microliter) decreased hemorrhagic and procoagulant activity. Edematogenic property of this venom decreased significantly by incubation with antivenom (78% to 38% by incubation with 1000 microliter of polyvalent antivenom). Intra peritoneal injection of this remedy following envenomation had no effect in relieving symptoms. Myonecrotic effects were seen by intramuscular injection of Vipera lebetina venom in rats. Conclusion: Our study shows that Iranian antivenom could neutralize some in vivo and in vitro hazardous effects of envenomation by this snake like hemorrhagic, edematogenic and procoagulant properties that paves the way for separation and purification of multiple enzymes present in this venom to investigate the neutralizing capacity from Razi Institute polyvalent antivenom.