مقاله كوتاه پژوهشي تشخيص مولكولي Spiroplasma citri در برخي ارقام مركبات با استفاده از آزمون PCR در مقايسه با DAS- ELISA

Brief report Molecular Diagnosis of Spiroplasma citri in Citrus Cultivars, Using PCR-based Assay in Compare with DAS-ELISA

Spiroplasma citri عامل بيماري استابورن از عوامل بيماريزاي مهم در صنعت مركبات ايران است. يكي از مهمترين روش هاي كنترل اين بيماري معرفي درختان مادري، مواد تكثير شونده رويشي و نهالستان هاي سالم به منظور ممانعت از استقرار منابع آلوده در باغات تازه احداث مي باشد. در همين راستا توان رديابي دو روش تشخيصي ELISA با استفاده از آنتي بادي پلي كلنال و PCR با استفاده از سه جفت آغازگر مختلف مقايسه و بررسي گرديد. نتايج، عدم كارامدي روش ELISA در تشخيص آلودگي هاي پنهان (در گياهان فاقد علايم بيماري) و تيتر هاي پايين بيمارگر را نشان داد و استفاده از اين روش تشخيصي در سيستم گواهي سلامت نهال، اشكالات قابل تاملي از جمله واكنش منفي دروغين را به همراه خواهد داشت. آزمون PCR و مشخصا آغازگرP89f/r در مقايسه با دو جفت آغازگر P58-1f/5r و P58-6f/4r در خصوص استرين هاي ايراني اعم از جدايه هاي جنوب و شمال ايران با موفقيت آلودگي را در غلظت هاي بسيار پايين و در فصول معتدل سال رديابي مي نمايد. در اين بررسي با استفاده از آزمون PCR و آغازگر P89f/r، از بين 350 نهال از ارقام مختلف مركبات، 6/4 درصد آن ها كه فاقد علايم تيپيك بيماري بودند، آلوده تشخيص داده شدند.

Spiroplasma citri, the causal agent of stubborn disease has become one of the destructive pathogen of citrus industry in Iran. One of the most important strategies for control of stubborn disease is using S. citri-free mother trees, propagative material and citrus nurseries and disease avoidance in new orchards. In this way, the efficiency of the standardized ELISA with poly clonal antibody and PCR protocol with three different primer pairs was assessed. The results revealed that ELISA was not able to detect low titre of infection (in symptomless samples) so using ELISA techniques in certification system was not recommended and has significant problem such as false negative reaction. PCR method and specially P89f/r primers in compare with two other primers P58-1f/5r and P58-6f/4r was able to detect low titre of north and south strains of pathogen in moderate seasons. Out of a total 350 samples screened for presence of S. citri by the PCR method only 4/6 % showing positive results in symptomless samples.