جداسازي مليتين از زهر زنبور عسل بومي ايران و بررسي اثر آن بر تكثير سلول‌هاي سرطاني دهانه رحم - رده HeLa

Isolation of Melittin from Iranian Honey Bee Venom and Investigation of Its Effect on Proliferation of Cervical Cancer- HeLa Cell Line

مقدمه: سرطان دهانه رحم دومين سرطان شايع در كشورهاي در حال توسعه مي‌باشد. با توجه به اينكه روش‌هاي متداول درمان به اندازه كافي موثر نبوده و با عوارض جانبي همراه است، جستجوي راه‌هاي درماني جديد با استفاده از تركيبات طبيعي اهميت ويژه‌اي دارد. اين مطالعه با هدف بررسي اثر مليتين مستخرج از زهر زنبور عسل بر تكثير سلول‌هاي سرطاني دهانه رحم- رده HeLa انجام پذيرفت. روش بررسي: مليتين با استفاده از روش كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا- فاز معكوس (RP-HPLC) از زهر زنبور عسل بومي ايران استخراج گرديد. جهت اطمينان از فعاليت بيولوژيك مليتين، تست هموليتيك بر روي گلبول‌هاي قرمز انجام گرديد. در اين مطالعه اثر مهاري مليتين بر تكثير و ميزان حيات (Viability) سلول‌هاي سرطاني رده HeLa بررسي گرديد. به اين منظور رده سلولي HeLa در پليت 96- خانه كشت داده شد. سپس در مجاورت غلظت‌هاي مختلف مليتين با زمان‌هاي 12 و 24 ساعت تيمار گرديد. در انتها حيات سلول‌ها با روش MTT در طول موج 540 نانومتر تعيين گرديد. نتايج: غلظتي از مليتين كه فعاليت هموليتيك 50 درصدي از خود نشان داد، µg/ml5/0=50HD شد، در حالي كه در مجاورت سرم جنين گاوي (FBS) فعاليت هموليتيك به µg/ml2=50HD كاهش يافت. ميزان زنده بودن 50 درصدي سلول‌هاي سرطاني در تيمار با مليتين با توجه به تست MTT با زمان انكوباسيون 12 ساعت، µg/ml1 به دست آمد. نتيجه‌گيري: مليتين داراي فعاليت هموليتيك قابل توجهي مي‌باشد و از نظر بيولوژيكي بسيار فعال است. نتايج تست MTT نشان داد كه مليتين در شرايط وابسته به غلظت و زمان انكوباسيون، تكثير سلول‌هاي HeLa را مهار مي‌كند، لذا مطالعات ديگر جهت بررسي مكانيسم اثر مليتين پيشنهاد مي‌گردد.

Introduction: Cervical cancer is the second prevalent cancer in developing countries and the sixth prevalent cancer in USA. Since conventional treatment methods are associated with detrimental side effects, searching for new drugs using natural ingredients is very important. Previous studies have shown that melittin (main component of honey bee venom) has anticancer properties along with the effect on cell membrane and activation of apoptosis. In this study, inhibitory effects of melittin on the viability and proliferation of cervical cancer cell line (HeLa) was investigated. Methods: Melittin was purified from honeybee venom using reversed-phase HPLC method. Then, biological activity of melittin was examined by hemolytic activity analysis on the red blood cells. In order to investigate whether melittin inhibits proliferation of HeLa cell, MTT assay was performed. HeLa cells were plated in a 96-well plate and treated with serially diluted concentrations of melittin for 12 and 24 hours. The viability of the cells was measured via MTT assay at 540nm. Results: Melittin showed a strong hemolytic activity (HD50=0.5 µg/ml) which can be reduced by FBS(HD50=2 µg/ml). Results of MTT assay indicated that melittin shows cytotoxic effect on cervical cancer cells with IC50 = 1.2 ug/ml at 12h incubation period. Conclusion: In this study, biological activity of melittin and inhibitory effect of FBS on hemolysis were determined via hemolytic activity analysis. MTT assay indicated that melittin induced cytotoxic effects in a dose dependent manner on cervical cancer cells and it also revealed dependence on incubation time as well.