بررسي مقايسه‌اي اثر رتينوييك اسيد اگزوژن بر اندام حركتي جلويي و عقبي جنين موش نژاد Balb/C درشرايط in vitro و مقايسه ميزان جذب آن

Effects of exogenous retinoic acid on forelimb and hind limb bud culture of rat in vitro

سابقه و هدف: رتينوييك اسيد يكي از مشتقات ويتامين A مي‌باشد كه در درمان آكنه، پسوريازيس و همچنين برخي سرطانها استفاده مي‌شود. رتينوييك اسيد در رشد و نمو و تمايز در طي مراحل تكويني مهره‌داران نقش مهمي را بازي مي‌كند. در اين تحقيق اثر رتينوييك اسيد كه يك مورفوژن موثر در رشد و نمو مي‌باشد را بصورت اگزوژن در كشت اندام حركتي مورد بررسي قرار داديم. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي موشهاي نر و ماده نژاد Balb/c را با هم آميزش داده و روز مشاهده واژينال پلاك، روز صفر حاملگي در نظر گرفته شد. در روز 12حاملگي، جنين‌ها را از لوله‌هاي رحمي خارج كرده و جوانه اندامهاي حركتي جلويي و عقبي را از جنين جدا كرده و در محيط كشت Eagle’ s MEM به همراه 20% سرم بند ناف جنين انسان به مدت دو روز كشت داديم. كشت‌ها در سه گروه كنترل، شم و تجربي تقسيم شدند. در گروه كنترل جوانه اندامهاي حركتي جنين در محيط كشت قرار داده شد و در گروه شم جوانه اندام حركتي در محيط كشت حاوي الكل تيمار شد (الكل حلال رتينوييك اسيد مي‌باشد). در گروه تجربي رتينوييك اسيد در سه غلظت 6-10، 5-10و 4-10مولار به محيط كشت اضافه شد. پس از دو روز انكوباسيون، نمونه‌ها در فيكساتيو بوين فيكس شده و از نظر مورفولوژي مورد بررسي قرار گرفتند، سپس مقاطع بافتي از نمو نه‌ها تهيه شد و توسط Alcian blue رنگ‌آميزي شده و اثر رتينوييك اسيد بر تعداد سلول غضروفي و طول و عرض اندامهاي حركتي بررسي شد. ميزان رتينوييك اسيد جذب شده از محيط كشت با استفاده از تكنيك H.P.L.C اندازه‌گيري شد. يافته ها: اثر توكسيك رتينوييك اسيد اگزوژن در رشد و نمو اندام حركتي قابل مشاهده است و اين تاثير بر اندام عقبي بيشتر از اندام جلويي است. نتيجه گيري: رتينوييك اسيد اگزوژن باعث كاهش طول محور پروكسيمال–ديستال اندامهاي حركتي و كاهش رشد انگشتان مي‌شود. همچنين رتينوييك اسيد از كندروژنز ممانعت مي‌كند و غلظتهاي بالا كاهش چشمگيري را در تعداد سلولهاي غضروفي اندامهاي حركتي سبب مي‌شود.

Background: Retinoic acid (RA), one of the vitamin A derivatives, is used for the treatment of acne, psoriasis and some forms of cancer. It plays an important role in the growth and differentiation during development of vertebrates. In this research the effects of exogenous retinoic acid was investigated on forelimb and hind limb bud culture in vitro. Material and methods: In this experiment, female mice mated with males and observation of vaginal plug was considered as day 0 of gestation. The embryos were removed from uterus at day 12, their limb bud were excised and cultured in Eagle’s minimum essential media with 20% human embryo cord serum for two days. Experimental limb bud received RA in three concentrations of 10 -6,10 -5 and 10-4 M. Sham limb bud, received only alcohol (the solvent) and control did not receive anything. Samples were fixed in the Bouin’s solution and stained with Alcian blue for morphological features. Histological studies were morphologically examined. Results: The toxic effects of RA exogenous on the development of limb buds were observed. This toxic effect was greater on fore limb bud. Conclusion: Our results showed that exogenous RA affects the growth and development of limb buds through reducing both the length of proximal–distal axis and the growth of digits in a dose-dependent manner. Microscopic studies revealed that RA hinders chondrogenesis in a dose-dependent manner with higher concentrations significantly reducing the number of limb bud chondrocytes.