اسپكتروفلومتري روشي براي سنجش كارآيي بيوسايدهاي متداول در كنترل قارچهاي مخرب در آثار و بناهاي تاريخي

Spectrofluorometry as a tool to evaluate biocide efficiency on deteriorating rock fungi

مشكل تخريب زيستي آثار و بناهاي باستاني مورد توجه بسياري از دانشمندان علاقه مند به آثار باستاني قرار گرفته است. در اين رابطه قارچها به عنوان يكي از مهم ترين عوامل مخرب سنگها معرفي شده اند و مطالعات گسترده اي جهت كنترل اين عوامل بيولوژيكي در دست بررسي است. هدف از پژوهش حاضر پيدا كردن و بهينه كردن روشي است كه با كاربرد آن بتوان كارآرايي تيمارهاي شيميايي كه براي حفظ آثار باستاني مورد استفاده قرار مي گيرند را ارزيابي نمود. يكي از معيارهايي كه در ارزيابي موفق تيمارهاي شيميايي مورد استفاده قرار مي گيرند سنجش تعداد سلول هاي زنده است. در اين پژوهش سلولهاي قارچي(A18)Trimmatostroma abietis و (J26) Exophilia jeanselmei تحت تاثير آلكيل بنزيل دي متيل آمونيوم كلرايد ((BAC يك درصد قرار گرفت. ابتدا سلولهاي قارچي با رنگ هاي فلورسيين دي استات ( (FDA، كلسيين ام (Cal AM) ، پروپيديوم يديد (PI) و تركيبي از آنها رنگ آميزي گرديد. سپس با استفاده از فلورومترتغييرات فلورسانس سلولهاي زنده اندازه گيري شد. سلولهاي رنگ آميزي شده با FDA به شدت رنگ گرفتند به طوري كه اين رنگ پذيري با ميكروسكوپ فلورسانس و نيز با سنجش فلورومتري قابل مشاهده بود. سلولهاي قارچي در حضور Cal AMرنگ پذيري ضعيفي را نشان دادند. اين در حالي است كه سلول هاي رنگ شده با PI هيچ گونه فلورسانسي را نشان ندادند. زماني كه تلفيق رنگها مورد استفاده قرار گرفت به لحاظ كمي و كيفي فلورسانس سلولي كاهش يافت. كاهش شدت فلورسانس FDA در تركيب با ساير رنگها نيز مشاهده شد. بنابراين با توجه به نتايج به دست آمده FDA مي تواند براي سنجش تيمارهاي شيميايي قارچهاي صخره اي مورد استفاده قرار گيرد. با استفاده از اين رنگ مي توان كارآيي تيمارهاي فيزيكي يا شيميايي را كمي كرد. نتايج نشان داد كه فلورومتريFDA روشي دقيق، قابل تكرار و به لحاظ زمان و مواد مصرفي بسيار مقرون به صرفه مي باشد.

Biodeterioration of monuments is one of the principal fields of interest for researchers in the conservation of cultural heritage. Microorganisms which are living on inorganic substrate can settle and spread on and into the rock materials and cause biological damages.The aim of this study was to assay effectiveness of chemical treatment which is applied in the restoration and renovation of cultural heritage by using a fluorometric method. Because cell viability is a critical parameter for assessment of success of biocide treatments, one of the objectives of research was to find a reliable method to estimate the efficacy of chemicals on rock fungi. The fluorometry tests were performed with two isolates A18 (Trimmatostroma abietis) and J26 (Exophilia jeanselmei). The cells were treated by Alkyl benzyl dimethyl ammonium chloride (BAC) 1%. Then the cells were stained with FDA (fluorescein diacetate) and Cal AM (Calcein AM), PI (Propidium Iodide), and combinations of them. The fluorometric method was done to measure the alterations of cell viability after chemical treatment. FDA stained cells performed a strong staining under microscopic as well as fluorometric recording. After cells were incubated in presence of Cal AM, fluorescence of individual cells was measured and a weak fluorescence was observed. Fungi stained by PI were not visible in any microscopic experiment. Furthermore, the fluorometric method did not show any considerable fluorescence intensity of PI stained cells. When combination of dyes was used, stained cells had not only a low yield qualitatively and quantitatively, also the fluorescence intensity of FDA was decreased. On the contrary, when FDA was used alone, strong fluorescence intensity was shown and it could well be used for chemical treatment assays and to quantify the efficacy of the chemical treatment. FDA fluorometry is accurate, reproducible and economic in both time a