بررسي بيان شاخص‌هاي سطحي CD133، CD44 و ABCG2 در رده‌هاي سلولي ملانوما و ارتباط آنها با سلول‌هاي بنيادي سرطان

Evaluating the expression of cell surface markers CD133, CD44 and ABCG2 in melanoma cell lines and its relationship with cancer stem cells

مقدمه و هدف: سلول هاي بنيادي ملانوما، مسيول تهاجم و متاستاز آن است. در اين پژوهش، بيان شاخص‌هاي كانديد سلول‌هاي بنيادي سرطان در رده‌هاي سلولي ملانوما و ارتباط بيان اين شاخص‌ها با ويژگي‌هاي بنيادينگي سلول بررسي شد. مواد و روش ها: ميزان بيان شاخص هاي CD133، CD44 و ABCG2 در رده هاي سلولي ملانوما (WM115، NA8، SK-MEL ، Me67،A375 و D10) توسط فلوسايتومتري سنجيده شد. پس از انتخاب شاخص و رده سلولي مناسب، سلول ها براساس بيان و عدم بيان شاخص منتخب به جمعيت مثبت و منفي جداسازي شدند؛ سپس عملكرد كلني زايي، تشكيل اسفروييد و همچنين بيان ژن هاي بنيادي NANOG، SOX2، OCT4 و KLF4 در سه جمعيت مثبت، منفي و رده سلولي جداسازي نشده ارزيابي شدند. نتايج : نتايج ما نشان داد كه در 85/1 ±65/28 درصد از رده سلولي D10 شاخص CD133 بيان شد. در-حالي كه در همه رده‌هاي سلولي تست شده، شاخص CD44 و ABCG2 فاقد بيان بودند يا بياني ضعيف داشتند. جمعيت CD133+ افزايش حدود 64/1برابر در قدرت كلني زايي (P < 0.05) و 2/2 برابر در تعداد ملانوسفير (p=000) در مقايسه با جمعيت CD133- نشان داد. بررسي بيان ژن هاي بنيادينگي نشان داد كه ژن NANOG و OCT4 در گروه CD133+ و ژن SOX2 در گروه CD133- داراي افزايش بيان بودند و هيچ تفاوتي در بيان ژن KLF4 در ميان گروه ها وجودنداشت. نتيجه گيري: يافته هاي اين پژوهش نشان دادند كه شاخص CD133 مي تواند به عنوان شاخص سلو ل هاي شبه بنيادي در رده ي سلوليD10 و ديگر سلول هاي ملانوما كه شاخص CD133 را بيان مي كنند، درنظر-گرفته شود.

Background and Objective: Melanoma is the most deadly type of skin cancer that has a high potency and rapid metastasis to other organs. It appears that cancer stem cells (CSCs) are responsible for invasion and metastasis. The aim of this study was to investigate the expression of cancer stem cells candidate markers and their association with stemness features in melanoma cell lines. Materials and Methods: The expression levels of CD133, CD44 and ABCG2 were measured in melanoma cell lines (WM115, NA8, SK-MEL, Me67, A375 and D10) by flow cytometry. Then, selected cell line was sorted up on the expression of selected stem cell marker into positive and negative populations. Afterward, The potential of cologenic, spheroid formation and expression of stem genes including NANOG, SOX2, OCT4 and KLF4 was estimated in positive, negative and unsorted cells. Results: Our results demonstrated that 28.65 ± 1.85% of D10 cell line expressed CD133. However, CD44 and ABCG2 were or (not) expressed in all cell lines. The CD133+ sorted cells showed an increase in colony formation about 1.64 fold (p < 0.05) and melanospheres about 2.2 fold (p=000) as compared to CD133-. The evaluation of stemness genes expression determined the significance of up-regulation of NANOG and OCT4 in CD133+ and SOX2 in CD133- respectively. There was no difference in KLF4 expression between the two groups. Conclusion: Findings of this research showed that CD133 can be considered as stem-like cells marker in D10 cell line and other melanoma cells which expressed CD133.