تعيين حدت جدايه‌هاي اشريشيا كولاي جدا شده از طيور در ايران با استفاده از تست كشندگي در جوجه‌هاي يك روزه

Virulence determination of Iranian Escherichia coli isolates from poultry in day-old chicks using a lethality test

‌چكيده زمينـه مـطالعه: كلي باسيلوز ناشي از اشريشيا كولاي يكي از مهم‌ترين بيماريهاي عفوني طيور مي‌باشد. درحاليكه تاثير فاكتورهاي حدت اشريشيا كولاي در پرنده در تعامل با عوامل تاثير‌گذار ديگر مي‌تواند متفاوت باشد، صرف وجود آنها تعيين‌كننده ميزان حدت باكتري براي پرندگان نمي‌باشد. لذا ضروري است كه قدرت بيماريزايي جدايه‌هاي اشريشيا كولاي بر روي پرندگان حساس آزمايش شود. هدف:‌ ‌هدف از انجام اين مطالعه تعيين ميزان حدت و مقايسه اثر 3 جدايه اشريشيا كولاي جدا‌شده از كلي باسيلوز طيور در ايران بر روي جوجه‌هاي يك روزه با بهره‌گيري از تست كشندگي بود. روش كار:‌ ‌هفتاد جوجه يك روزه به 3 گروه تيمار 20 قطعه‌اي و 2 گروه كنترل 5 قطعه‌اي تقسيم شدند. هر گروه تيمار به يك جدايه اختصاص داده شد و به 4 زيرگروه 5 قطعه‌اي تقسيم شد. هر جدايه در محيط آبگوشت مايع رشد داده شد و پس از 3 بار شستشو با PBS رقيق سازي شد. سپس ميزان mL5/0 از محلول كشت رقيق نشده (حاوي CFU/mL 109 ~ باكتري)، و رقت‌هاي 1/0، 01/0 و 001/0 هر كشت به هر كدام يك از جوجه‌ها در هر زيرگروه 5 قطعه اي از راه زير جلد در پشت گردن تلقيح شد. به يك گروه كنترل PBS تزريق شد و گروه كنترل منفي نيز چيزي دريافت نكرد. سپس جوجه‌ها تا 6 روز، هر 12 ساعت كنترل شدند. جوجه‌هاي تلف شده در طي 6 روز و همچنين جوجه‌هاي زنده مانده كالبدگشايي و از قلب و كبد آنها براي آزمـايشـات بـاكتـريـولـوژيـك نمـونـه‌گيـري شـد. حـدت هر جدايه اشريشيا كولاي بر اساس زمان مرگ، مشاهدات آسيب شناسي بارز و يافته‌هاي باكتري‌شناسي امتياز‌بندي شد. نتايج: كليه سويه‌هاي اشريشيا كولاي مورد بررسي در اين مطالعه توانايي ايجاد تلفات و جراحات بارز كلي‌باسيلوزي را داشتند. تفاوت معني‌داري بين جدايه‌ها از نظر حدت در رقت‌هاي مشابه مشاهده نشد اما تفاوت‌ها با گروه‌هاي PBS و كنترل منفي معني‌دار بود ‌(05/0“‌. p) نتيجه‌گيري‌نهايي:‌ ‌اين مطالعه مشخص نمود كه سه جدايه اشريشيا كولاي كلي‌باسيلوز قادر به ايجاد تلفات در جوجه‌هاي يك روزه بودند. اين يافته‌ها آگاهي ما را در مورد خصوصيات حدت سه جدايه ايراني اشريشيا كولاي با منشا كلي‌باسيلوز طيور افزايش داد. ‌ ‌

Abstract: BACKGROUND: Colibacillosis due to Escherichia coli is one of the most important infectious diseases in poultry. While the influence of E. coli virulence factor in birds may differ due to interactions with other influential factors, the sole presence of such factors in E. coli does not determine its pathogenicity. Therefore, it is necessary to test the pathogenic capability of E. coli isolates on susceptible birds. OBJECTIVES: The purpose of this study was to determine the virulence of three E. coli isolates from colibacillosis and compare their effects on day-old chicks using a lethality test. METHODS: Seventy 1-day-old chicks were divided into 3 treatment groups of 20 chicks and 2 control groups of 5 chicks. Each treatment group was assigned to one E. coli isolate and divided into 4 sub-groups of 5 chicks. The overnight broth culture of each E. coli isolate was washed with PBS three times and diluted. Then, 0.5 ml of undiluted culture (~109 CFU/mL), and the dilutions of 0.1, 0.01, and 0.001 of each culture were injected subcutaneously to each of the 5 birds in each subgroup behind the neck. One group of 5 birds was injected by PBS while negative control group did not receive anything. The chicks were monitored every 12 hours for 6 days. The dead chicks during the course of the experiment and all survived ones were necropsied and samples were taken from hearts and livers for bacteriological culture. Virulence of each E. coli isolate was evaluated based on a scoring system developed on death time, gross pathological observations, and bacteriological findings. RESULTS: All E. coli isolates of this study were capable of causing mortalities and producing the lesions typical of colibacillosis. There were no significant differences among the three E. coli isolates in their in vivo virulence abilities but the difference between each of the three E. coli isolates and each of the two control groups was significant (p|||£|0.05). CONCLUSIONS: This study determined that our E. coli isolates were able to cause mortalities in day-old chicks. These findings increased our knowledge on the virulence characteristics of three Iranian E. coli isolates originated from avian colibacillosis.