ميزان بلوغ و تكوين جنيني تخمك مرحله ژرمينال وزيكول موش به بلاستوسيست پس از انجماد شيشهاي

In Vitro Maturation and Embryo Development to blastocyst Mouse Germinal Vesicle Oocytes After Vitrification

چكيده زمينه و هدف: يكي از روش‌هاي نگهداري به منظور حفظ قدرت باروري، انجماد شيشه‌اي است كه روشي ساده و فوق سريع است. بهبود ميزان حاملگي با استفاده از روش‏هاي انجمادي تخمك‏ها به عنوان يك فاكتور مهم به پيشرفت فناوري باروري آزمايشگاهي كمك مي‌كند. هدف اين مطالعه ارزيابي ميزان زنده ماندن، بلوغ آزمايشگاهي و تكامل جنيني تخمك مرحله ژرمينال وزيكول به بلاستوسيست پس از انجماد شيشه‏اي يك مرحله‏اي و چند مرحله‏اي ‌بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي تخمك مرحله‌ي ژرمينال وزيكول، با و بدون سلول‌هاي كومولوس در محلول انجماد شيشه‌اي كه شامل 30 درصد اتيلن گليكول، 18 درصد فايكول 70 و 3/0 مولار ساكارز به روش يك مرحله‏اي و چند مرحله‏اي منجمد شدند. پس از انجماد و قرار دادن در داخل نيتروژن مايع، تخمك‌ها ذوب شده و دو مرتبه در داخل محيط كشت شستشو داده شدند. ميزان زنده ماندن تخمك‌ها، بلوغ تخمك و رسيدن آن به مرحله متافاز2، لقاح و تكوين جنين به مرحله‏ي بلاستوسيست بعد از انجماد- ذوب در آزمايشگاه بررسي شدند. داده‌ها با آزمون‌هاي آماري آناليز واريانس يك طرفه و تست توكي تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها: ميزان زنده ماندن، بلوغ تخمك به مرحله متافاز 2، لقاح و ميزان تشكيل جنين بلاستوسيست در روش انجماد شيشه‏اي چند مرحله‏اي به طور معني داري نسبت به روش انجماد شيشه‏اي يك مرحله‏اي بالاتر بود(05/0 P < ). نتيجه‌گيري: تخمك‏هاي مرحله‏ي ژرمينال وزيكول منجمد شده با سلول‏هاي كومولوس و هم‌چنين روش انجماد شيشه‏اي چند مرحله‏اي اثر مثبتي بر ميزان بلوغ و ميزان تكوين جنين به مرحله بلاستوسيست نسبت به تخمك مرحله‏ي ژرمينال وزيكول بدون سلول‏هاي كومولوس و روش انجماد شيشه‏اي يك مرحله‏اي دارد.

Background & aim: Vitrification is a simple and ultra rapid technique for the conservation of fertility. Improving pregnancy rate associate with the use of cryopreserved oocytes would be an important advanced in human assisted reproductive technology (ART). The purpose of this study was to evaluate viability oocytes, In vitro maturation and embryo development vitrified germinal vesicle oocytes after single and stepwise exposure to cryoprotectants. Methods: In this experimental study, germinal vesicle oocytes with or without cumulus cells were transferred to vitrification solution which was composed of 30% (v/v) ethylene glycol, 18% (w/v) Ficoll-70, and 0.3 M sucrose, either by single step or in a step-wise way. After vitrification and storage in liquid nitrogen, the oocytes were thawed and washed two times in medium TCM119 and then subjected to in vitro maturation, fertilization and culture. Data analysis was performed by one-way variance and Tukey tests. Results: The oocytes survival rates after vitrifying-warming, maturation rate, the capacity of fertilization and embryonic development to Blastocyst were examined in vitro. The oocytes surviving, maturition and embryo developmental rate in the step-wise exposure were significantly higher (P < 0/05) compared with corresponding rate in the single step procedure. Conclusion: The results of present study indicated that oocytes vitrified with cumulus cells and stepwise procedure had positive effect on survival, maturation and developmental rate to blastocyst than oocytes without cumulus cell and single step procedure. Key words: Germinal Vesicle Oocyte, Vitrification, Ethylene Glycol, Blastocyst