مروري بر وكتورهايminicircle

Review on Minicircle DNA Vectors

پلاسميد‌هاي استاندارد از دو قسمت توالي‌هاي باكتريايي و واحد بياني يوكاريوتي تشكيل مي شوند. مطالعات اخير نشان داده اند كه وجود توالي‌هاي باكتريايي در پلاسميد علاوه بر ايجاد مشكلات ايمني، با گذشت زمان سبب كاهش بيان ژن خارجي مي گردد. بر اين اساس وكتور‌هاي minicircle ساخته شدند. وكتور‌هاي minicircle فاقد توالي‌هاي باكتريايي بوده و فقط حاوي واحد بياني يوكاريوتي (توالي كدكننده ژن مورد نظر به همراه پروموتر و توالي poly ) مي باشند. وكتور‌هاي minicircle در اثريك نوتركيبي درون مولكولي توسط يك ريكامبيناز، ساخته مي شوند، به طوري كه ريكامبيناز توالي‌هاي اختصاصي خود را كه در دو طرف واحد بياني يوكاريوتي قرار گرفته اند، شناسايي كرده و با انجام يك نوتركيبي درون مولكولي سبب جداشدن واحد بياني يوكاريوتي به صورت يك حلقه (minicircle) مي گردد .تا كنون توليد minicircle با استفاده از ريكامبيناز‌هايي مانند اينتگراز ?، اينتگراز فاژ ?C31، ريكامبيناز Cre و FLP صورت گرفته است كه هر كدام مزايا و معايبي دارند. مطالعات متعدد نشان داده اند كه وكتور‌هاي minicircle وكتور‌هايي ايمن و خارج كروموزومي هستند كه سبب افزايش بيان و افزايش مدت زمان بيان ژن در in vivo و in vitro مي گردند.

Standard plasmids consist of two parts: a bacterial backbone and a eukaryotic expression cassette. Recent studies demonstrate that the bacterial backbone in plasmids results in immunity problems and reduction of transgene expression. Based on this fact, minicircle DNA vectors were constructed. Minicircle vectors lack the bacterial backbone and only contain the eukaryotic expression cassette (transgene coding DNA sequence, promoter and poly A signal). Minicircle vectors are constructed by a recombinase–mediated intramolecular recombination. In this way, recombinase identifies its recognition sites at two sides of the eukaryotic expression cassette and by a recombination performance caused in segregation of eukaryotic expression cassette as a circle (minicircle). Up to now, minicircle vectors are produced by recombinases such as: ? integrase, ?C31 integrase, Crerecombinase and FLP recombinase, with specific advantages and disadvantages. Several studies have demonstrated that minicircles are safe and episomal vectors that enhance transgene expression and extentand duration of tansgene expression in vivo and in vitro.