مهار تكثير سلول‌هاي NB4 به طور وابسته به زمان تحت تاثير مهاركننده غير نوكليوتيدي تلومراز از طريق كاهش رونويسي زير واحد كاتاليتيك

Time-Dependent Inhibitory Effect of Non-Nucleosidic Telomerase Inhibitor on NB4 Cell Proliferation through Transcriptional Suppression of Catalytic Subunit

چكيده سابقه و هدف به دليل فعاليت تلومراز در تكثير نامحدود اكثر سلول‌هاي سرطاني از جمله بدخيمي‌هاي خوني مانند لوسمي پروميلوسيتيكي حاد(APL)، مهار تلومراز روش مناسبي جهت درمان مي‌باشد. در اين مطالعه به بررسي اثر BIBR1532 ، مهاركننده غيرنوكليوزيديكي، بر روي مهار تكثير سلولي و بيان ژن hTERT كه به عنوان جز اصلي در فعاليت تلومراز نقش دارد، پرداختيم. مواد و روش‌ها در يك مطالعه تجربي، به منظور بررسي اثر BIBR1532 ، سلول‌ها در حضور غلظت‌هاي مختلفي از دارو كشت داده شدند و آزمون‌هايTrypan blue exclusion assay ، BrdU cell proliferation assayو Quantitative real-time PCR جهت بررسي اثر دارو بر درصد زنده‌ماني، تكثير سلولي و بيان mRNA ژن hTERT در زمان‌هاي متفاوت صورت گرفت. يافته‌ها BIBR1532 قادر به كاهش درصد زنده‌ماني و مهار تكثير سلول‌ها مي‌باشد. تيمار سلول‌ها با BIBR1532 در غلظت‌هاي 10، 30، 60 و 90 ميكرومولار پس از طي 24، 48 و 72 ساعت به صورت وابسته به دوز و زمان منجر به كاهش ميزان ساخت DNA سلول‌ها گرديد. علاوه بر اين، نتايج نشان مي‌دهد كه داروي BIBR1532 همراه با افزايش غلظت دارو و زمان تيمار سلول‌ها به طور قابل توجهي منجر به كاهش ميزان mRNA ژن hTERT مي‌گردد. نتيجه گيري با توجه به طول تلومر كوتاه و فعاليت بالاي آنزيم تلومراز در بيماران APL و هم‌چنين اثر بخشي دارويBIBR1532 در القاي اثر آنتي پروليفراتيو در رده سلولي NB4 ، مي‌توان درمان‌هاي مبتني بر استراتژي آنتي‌تلومرازي را به عنوان راه‌كار درماني مناسب در بيماران APL مد نظر قرار داد.

Abstract Background and Objectives Since stimulated telomerase activity provides nearly all of human malignancies including acute promyelocytic leukemia (APL) with unlimited proliferative potential, targeting telomerase seems to be an effective approach in cancer treatment. In this regard, BIBR1532, a small-molecule inhibitor of telomerase, has been shown to increase the therapeutic window of current chemotherapeutic regimens. This study was aimed to investigate the effects of BIBR1532 on cell proliferation as well as transcriptional alteration of hTERT (the catalytic subunit of telomerase). Materials and Methods NB4 leukemic cells were treated with various concentrations of BIBR1532 and succeeding trypan blue exclusion assay, BrdU cell proliferation assay, and quantitative real-time PCR were applied to investigate cell viability index, cell proliferation and time-dependent alteration of hTERT mRNA levels. Results BIBR1532 decreased cell viability index and exerted an antiproliferative effect against NB4 leukemic cells; we found that exposing cells with BIBR1532 at 30, 60 and 90 ?M for 72 h inhibited DNA synthesis rate by 24, 45 and 70%, respectively. Furthermore, transcriptional suppression of hTERT was found upon NB4 treatment by BIBR1532 in a time- and dose-dependent manner. Conclusions Based on the short telomere length and high terlomerase activity in APL as well as antiproliferative effect of BIBR1532 against NB4 cells, anti-telomerase-based therapy might be regarded as a successful strategy in APL therapy.