بررسي بيان microRNA هاي خانوادهlet-7 در سلولهاي CD+4 T تحت القا آنتي بادي هايCD2,CD3,CD28 و اينترلوكين 2 و تعيين اهداف احتمالي آنها

Investigation of let-7 family expression in CD4+ T cells induced by anti-CD2, CD3, CD28 and Interleukin-2 and identifying their potential targets

سابقه و هدف: در اين تحقيق بيان microRNA هاي خانواده let-7 در سلولهايCD4+T فعال شده با آنتي-CD2,CD3,CD28 تحت تيمار با اينترلوكين 2 و يا بدون تيمار با آن مورد بررسي قرار گرفت. خانواده let-7 داراي دو خاصيت انكوژني و مهاركنندگي تومور در سلولهاي مختلف است. مواد و روش ها: به اين منظور سلولهايCD4+T بكر با ريز دانه هاي حاوي آنتي-CD2,CD3,CD28 تيمار شدند و تحت القا اينترلوكين 2 خارجي (75/0 نانوگرم بر ميلي ليتر) به مدت 72 ساعت قرار گرفتند..از سلولهاي فعال شده و سلولهاي تحت تيمار با اينترلوكين 2، RNA تام استخراج گرديد. بعد از سنتز cDNA، بيان microRNA ها به روش Q-RT-PCR array با استفاده از كيت (miRCURY LNATM universal RT miRNA PCR kit).صورت گرفت. آناليز داده ها به كمك نرم افزار GeneX و روش ??Ct انجام شد. يافته ها: در سلولهايCD4+T فعال شده با آنتي- CD2,CD3,CD28 در مقايسه با سلولهاي تحت تيمار اينترلوكين 2 افزايش بيان 5 عضو خانواده let-7 مشاهده گرديد. از جمله اهداف پيش بيني شده آنها به كمك miRDB وmiRanda مي توان به فسفاتازهاي DUSP، PTPN و خانواده SOCS اشاره نمود كه دو خانواده اولي در مهار مسير پيام رساني TCR و آخري در مهار مسيرJAK/STAT در سلولهاي فعال شده نقش دارد. نتيجه گيري: به نظر مي رسد miRNA هاي مختلف از جمله خانواده let-7 با مهار بيان ژنهاي خاص در سطح پس از رونويسي در كنترل مسيرهاي موثر در گسترش كلوني جهت ايجاد پاسخ مناسب ايمني در سلولهايCD4+T فعال شده نقش مهمي ايفا كنند.

Background. The aim of this study was to evaluate let-7 family members expression in activated naïve CD4+ T cells and IL-2 induced cells. Let-7 family has oncogenic and tuomor suppressive activity in different cells. Methods. Naïve CD4+ T cells were activated by anti-CD2, CD3, CD28 microbeads. After 3 days, the activated cells stimulated by IL-2(0.75ng/ml). after 72h total RNA extracted the cells and c-DNA synthesis and Q-RT-PCR performed by miRCURY LNATM universal RT miRNA PCR kit. miRNA expression analyzed by geneX software and ??Ct method. Results. Five members of let-7 family over-expressed in activated cells compared with IL-2 induced cells. Targets Predicted by miRDB and miRanda software including families of DUSP, PTPN and SOCS that two first families inhibit TCR signaling and latest suppress JAK/STAT pathway. Conclusion. It appears that let-7 family play important role in clonal expansion of activated CD4+ T cells by specific genes suppression in post-transcriptional levels for appropriated immune response.