ارزيابي قدرت تهاجمي سويه ضعيف شده شيگلا ديسانتري تيپ 1 به عنوان كانديد توليد واكسن

Evaluation of Live Attenuated Shigella dysenteriae Type 1 Strain as a Candidate Vaccine

هدف: شناسايي نسخه پلازميدي ژن ipaD در باكتري شيگلا ديسانتري تيپ 1 و ارزيابي قدرت تهاجمي سويه زنده ضعيف شده از باكتري شيگلا ديسانتري حاصل از حذف نسخه پلاسميدي ژن ipaD در خوكچه هندي هدف مطالعه حاضر است. مواد و ر وشها: با استفاده از آزمون هاي بيوشيميايي، آنتي بادي و واكنش زنجيره اي پليمراز (PCR)، گونه و سروتيپ شيگلاي جدا شده از بيمار مشخص گرديد. نسخه پلازميدي ژن ipaD شناسايي گرديد. سويه شيگلاي تخفيف حدت يافته از طريق حذف نسخه پلاسميدي ژن ipaD توليد و از طريق تستهاي مذكور تاييد شد. عدم حضور ژن ipaD بوسيله واكنش زنجيره اي پليمراز در مقايسه با سويه وحشي مورد آزمايش قرار گرفت. حساسيت هاي آنتي بيوتيكي سويه هدف بررسي شد. رقت هاي مختلف از باكتري كشت شده ايجاد و تعداد كلوني ها براي هركدام شمارش شد. رقت خاصي از كشت كه تعداد سلول هاي موجود در آن براي تست ورم ملتحمه چشم مناسب است توليد گرديد. 6 خوكچه هندي تهيه شد كه 3 عدد به عنوان كنترل و 3 عدد به عنوان مورد آزمايش در نظر گرفته شدند. ارزيابي قدرت تهاجمي سويه تخفيف حدت يافته بوسيله آزمايش ايجاد ورم ملتحمه چشم در چشم خوكچه هندي بررسي گرديد. يافته ها: سويه شيگلا ديسانتري تيپ1 تخفيف حدت يافته بوسيله آزمايش سرولوژيكي و PCR تاييد گرديد. عدم حضور ژن ipaD در سويه مذكور تاييد شد. چالش اين سويه روي خوكچه هندي نشان داد كه سويه مذكور قدرت تهاجم به سلولهاي ميزبان را از دست داده بود. نتيجه گيري: ژن ipaD يكي از ژنهاي تهاجمي شناخته شده در باكتري شيگلا ديسانتري است. نسخه پلاسميدي اين ژن نقش مهمي در تهاجم شيگلا دارد و حذف ژن مذكور قدرت تهاجمي باكتري را كاهش ميدهد. شيگلا ديسانتري تخفيف حدت يافته كه ژن ipaD آن حذف شده باشد مي تواند كانديد مناسبي براي توليد واكسن عليه شيگلوزيس باشد.

Aim: This study aims to detect the ipaD plasmid in Shigella dysenteriae type 1 and evaluate the invasive ability of a live, attenuated Shigella dysenteriae type 1 generated from deletion of the ipaD plasmid. The attenuated strain was tested in guinea pigs. Materials and Methods: We performed biochemical and antibody tests in addition to PCR analysis, to identify the strain and serotype of an isolated Shigella strain. The plasmid version of the ipaD gene was recognized. We generated a live, attenuated Shigella serotype by deletion of the plasmid version of the ipaD gene, which was confirmed by the above mentioned tests. Absence of the ipaD gene was assessed in a PCR reaction and compared to the wild type strain. Various dilutions of cultured bacteria were prepared and colony numbers counted. We prepared specific dilution which was appropriate for conducting the keratoconjunctive test. We used 6 guinea pigs that were divided into two groups, control (n=3) and experimental (n=3). C Invasion capability of produced strain was evaluated by keratoconjunctive test in guinea pigs. Results:The produced live attenuated Shigella dysenteriae type 1 was confirmed through serological tests and PCR. Absence of ipaD was confirmed. Results of keratoconjunctive test has shown that this strain lost its ability to invade host cells. Conclusion: The plasmid version of ipaD gene plays a critical role in Shigella invasiveness. Deletion of mentioned gene reduces the invasion ability of these bacteria. Therefore, Live attenuated ?ipaD shigella dysenteriae can be an appropriate candidate to produce vaccine against shigellosis.