اثرعوامل مترشحه استافيلوكوكوس اوريوس بر بقاي نوتروفيل‏ها و مونوسيت‏ها در شرايط in vitro

The effect of Staphylococcus aureus extraction factors on viability of neutrophils and monocytes in vitro

مقدمه: با توجه به نقش شناخته شده اگزوپروتيين هاي استافيلوكوكوس اوريوس در سركوب كردن پاسخ ايمني ذاتي در عفونت هاي انساني، هدف از مطالعه حاضر، تعيين نقش عوامل مترشحه باكتري در زنده ماني نوتروفيل ها و مونوسيت‏ها در گاوان سالم و مبتلا به ورم پستان است. مواد و روش‏‏ها: در تحقيق حاضر، پنج نمونه شير از گاوان مبتلا به ورم پستان و پنج نمونه از گاوان سالم تهيه شد. نمونه خون هپارينه از گاوان مبتلا و سالم به منظور جداسازي نوتروفيل ها و مونوسيت ها گرفته شد. نوتروفيل ها با استفاده از داروي مگلومين و مونوسيت ها در هيستوپك جدا سازي شدند. عوامل مترشحه از باكتري استافيلوكوكوس اوريوس ATCC23219 تهيه و غلظت پروتيين موجود در آن به روش برادفورد به ميزان 400 ميكروگرم در ميلي ليتر تعيين شد.تاثير غلظت هاي مختلف عوامل مترشحه بر ميزان زنده ماني نوتروفيل ها و مونوسيت ها به ترتيب بروش فلوسيتومتري و ايمونوفلورسانس تعيين شد. نتايج: در مورد گاوان سالم، عوامل مترشحه حاوي 800 ميكروگرم در ميلي ليتر پروتيين و در مورد گاوان مبتلا به بيماري400 ميكروگرم در ميلي ليتر پروتيين، بيشترين مرگ سلولي مونوسيت ها و نوتروفيل ها را داشتند. بررسي مراحل مختلف آپوپتوز در مونوسيت ها و نوتروفيل هاي گاوان سالم و مبتلا به بيماري نشان داد كه حضور عوامل مترشحه در گاوان سالم موجب كاهش آپوپتوزدر مونوسيت ها و در گاوان بيمار موجب افزايش آپوپتوز شد. بحث و نتيجه‏گيري: ترشحات استافيلوكوكوس اوريوس باعث القا آپوپتوز و تا حدودي نكروز، هم در نوتروفيل‏ها و هم در مونوسيت هاي گاوان سالم و بيمار مي شود، ولي اين سلول ها در گاوان بيمار نسبت به مرگ سلولي حساس‏تر از گاوان سالم هستند. از طرفي در گاوان سالم نوتروفيل ها و در گاوان بيمار مونوسيت ها نسبت به مرگ سلولي حساس‏ترند. وقتي گاوان به بيماري ورم پستان استافيلوكوكوس ارويوس مبتلا مي شوند، عوامل مترشحه از اين باكتري تاثير بيشتري روي مونوسيت ها نسبت به نوتروفيل‏ها دارند. آنچه مسلم است، تعيين دقيق محتويات ترشحات باكتري و نيز مكانيسم عمل آن‏ها به روشن شدن مطلب كمك خواهد كرد.

Introduction: Staphylococcus aureus exoproteins are known to have potent effects on cells of the immune system in human infections and their primary inhibitory effects in vivo on innate immune responses. The objective of this study was to determine the effects of bacterial extractions on viability of neutrophils and monocytes in the healthy and the infected cattle (mastitis). Materials and Methods: In order to isolate of neutrophils and monocytes, heparinized blood samples were taken from the healthy (n=5) and the infected cattles (n=5). Neutrophil and monocyte isolation was carried out using meglumine and histopaque compounds respectively. Secretory factors from Staphylococcus aureus ATCC23219 were extracted and its concentration assayed by Bradford method and were determined to be 400 ?g/ml. The effect of different concentrations of the extract on viability of neutrophils and monocytes was determined by flowcytometery and immunoflorcent respectively. Results: The results showed that in the healthy and the infected cattles, extract containing 800 and 400 ?g/ml protein, respectively caused the most death in monocytes and neutrophils. It also seemed that in the infected cattles, monocytes were more sensitive to cell death than the neutrophils. Discussion and Conclusion: The extract of Staphylococcus aureus induces apoptosis and necrosis in both neutrophils and monocytes of both the healthy and the infected cattle but the cells in the cattle with mastitis are more sensitive to apoptosis than in the non- infected cattles. In the case of mastitis due to Staphylococcus aureus, the bacterial extracts effects on monocytes and not the neutrophils. However, determination of bacterial extraction fractions and their effect on immune system cells are strongly recommended. Key words: Staphylococcus aureus, Bacterial extraction factors, Neutrophil, Monocyte