شناسايي جدايه‌هاي نكروتوكسيژنيك اشريشياكلي در موارد عفونت‌هاي گوارشي گوساله‌ها در منطقه كرمان

Determination of necrotoxigenic Escherichia coli isolates in the cases of gastrointestinal infections of calves in Kerman region

هدف از اين مطالعه شناسايي سويه‌هاي نكروتوكسيژنيك اشريشياكلي و تعيين گروه سرمي آنها در عفونت‌هاي گوارشي گوساله‌ها بود. سواب‌هاي ركتال از 163 گوساله اخذ شده و در محيط مك كانكي جهت جداسازي اشريشياكلي به روش خطي كشت داده شد. كلني‌هاي مشكوك در محيط‌هاي تفريقي بيوشيميايي به منظور تاييد تشخيص كشت داده شدند و از هر نمونه يك كلني تاييد شده برداشت و در محيط مايع لوريا برتاني (LB) كشت داده شده و به همراه 30 درصد گليسرول در دماي 20- درجه سانتي‌گراد ذخيره گرديد. روش مولتي‌پلكس PCR جهت شناسايي جدايه‌هاي مثبت از نظر حضور ژن‌هاي خانوادهcnf و cdt انجام گرديد. ژن‌هاي مذكور بترتيب عوامل سيتوتوكسيك نكروز دهنده و توكسين‌هاي تورم دهنده كشنده سلول را كد مي‌كنند. جدايه‌هاي مثبت در آزمايش مرحله اول به منظور تعيين واريانت ژن‌هاي مذكور در چندين آزمايش PCR ساده به كار گرفته شدند. گروه سرمي جدايه‌هاي نكروتوكسيژنيك تعيين شد. بر اساس نتايج، از مجموع 163 نمونه اخذ شده 138 جدايه اشريشياكلي جدا گرديد. در آزمايش‌هاي PCR مرحله اول، 12 جدايه (69/8درصد) باندهاي 1150 و 466 جفت بازي داشتند و از نظر ژن‌هاي خانواده cnf و cdt مثبت بودند. تمامي 12 جدايه، حضور ژن‌هاي عامل سيتوتوكسيك نكروز دهنده نوع 2 و توكسين تورم دهنده كشنده سلول نوع 3 را نشان دادند و بعنوان جدايه نكروتوكسيژنيك 2 (NTEC2) در نظر گرفته شدند. همه جدايه‌ها فاقد ژن cnf1 بودند كه در جدايه‌هاي نكروتوكسيژنيك 1 (NTEC1) يافت مي‌شوند. نتايج آزمايش تعيين گروه سرمي جدايه‌هاي نكروتوكسيژنيك 2 نشان داد كه 3 جدايه متعلق به گروه سرمي O15، 2 جدايه O78 و 1 جدايه متعلق به O8 مي‌باشد. بقيه 6 جدايه بوسيله آنتي‌سرم‌هاي استاندارد قابل شناسايي نبودند. در اكثر مطالعات انجام شده در ساير نقاط دنيا فقط سويه‌هاي نكرو توكسيژنيك نوع 2 از گوساله‌ها جدا شده است كه متعلق به گروه‌هاي سرمي مختلفي بوده‌اند.

The purpose of this study was to determine the necrotoxigenic E. coli isolates and their O serogroup from calves with gastrointestinal tract infections. Rectal swabs were obtained from 163 calves and streaked on Mac Conkey agar for isolation of E. coli. Suspected colonies were cultured in biochemical media to confirm the isolates. One confirmed colony from each sample was cultured in Luria Bertani broth (LB) and stored with 30% glycerol at -20°C. Multiplex PCR were undertaken to determine the positive isolates for cnf and cdt families genes encoding cytotoxic necrotizing factors and cytolethal distending toxins respectively. The positive isolates in the first step were used in several simplexes PCR to detect the variants of cnf and cdt genes. The necrotoxigenic isolates were also sero-grouped. According to the results, 138 E. coli were isolated from 163 samples. In the PCRs of the first step, 12 (8.69%) isolates had the 1150 and 466 base pair bands which were positive for cnf and cdt family’s genes. All of the 12 positive isolates showed the presence of cnf2 and cdtIII genes and considered as necrotoxigenic E. coli 2 (NTEC2). None of the isolates was positive for cnf1 gene which was found in necrotoxigenic E. coli 1 (NTEC1) isolates. Serogroup determination of NTEC2 isolates showed that three isolates belonged to O15, two isolates to O78 and one isolates to O8; the remaining of isolates (6) were non-typeable by standard antisera. In most studies in other parts of world, NTEC2 strains were isolated from calves that belonged to different O serogroups.