شناسايي چندشكلي اگزون ششم ژن Pit1 در مرغ بومي آذربايجان غربي با استفاده از روش PCR-SSCP

Detection of polymorphism of Pit1 gene exon 6 in West Azerbaijan native chickens using PCR-SSCP technique

ژن هاي بخش سوماتوتروپيك شامل عوامل رونويسي هستند كه در تكامل و رشد جوجه نقش اساسي دارند. ژن Pit1 عامل ويژه رونويسي هيپوفيزي است كه نقش عمده اي در تمايز هيپوفيز قدامي و تنظيم ژن هاي هورمون هاي پرولاكتين، رشد و محرك تيروييدي دارد. ژن Pit1 به عنوان يك ژن كانديداي كليدي براي صفات توليدي طيور مورد توجه قرار گرفته است. اين پژوهش به منظور بررسي چندشكلي اگزون ششم ژن Pit1 با استفاده از روش چندشكلي فضايي رشته هاي منفرد مبتني بر واكنش زنجيره اي پليمراز در مرغ بومي آذربايجان غربي صورت گرفت. در اين طرح از 100 پرنده به صورت تصادفي خون‌گيري شده و DNA نمونه هاي خون استخراج گرديد. براي تعيين كيفيت DNA از ژل آگارز يك درصد استفاده شد. ناحيه اگزون ششم جايگاه Pit1 به طول bp 179 با استفاده از واكنش زنجيره اي پلي‌مراز تكثير و محصولات PCR توسط روش SSCP آناليز شدند. محصولات PCR توسط الكتروفورز با ژل پلي آكريلاميد 10 درصد و رنگ‌آميزي نيترات نقره آشكار گرديد. نتايج SSCP محصولات PCR با ژل پلي آكريل آميد سه ژنوتيپ AA، AB و BB را آشكار ساخت. ژنوتيپ هاي اين جايگاه ژني انحراف از تعادل هاردي - واينبرگ را نشان دادند. شاخص شانون، شاخص Nie و هتروزيگوسيتي مشاهده شده به ترتيب 59/0، 67/1 و 32/0 به دست آمد. نتايج به دست آمده نشان داد كه نشانگر Pit1 داراي چندشكلي نسبتاً بالايي است و مي‌تواند در برنامه هاي اصلاح نژادي آينده مورد توجه قرار گيرد.

Somatotropical genes are as transcription factors that have crucial role in chicken growth. Pit1 gene is a pituitary specific transcription factor that has major roles on the differentiation of anterior pituitary and the regulation of the prolactin, growth hormone and thyroid-stimulating hormone-B genes. Pit1 gene is regarded as a key candidate gene for productive traits of chickens. This study was conducted to determine the polymorphism of Pit1 gene exon 6 of west Azerbaijan native chickens using Polymerase chain reaction - Single-strand conformation polymorphism. Blood samples were randomly collected from 100 birds and DNA was extracted from the blood samples. Exon 6 of Pit1 gene encompassing 179 bp was amplified. The PCR products were electrophoresed in 10% polyacrylamide gel and stained with silver nitrate. Based on SSCP analyze of PCR products, three genotypes including AA, AB and BB were identified. The genotypes in this locus deviated from Hardy-Weinberg equilibrium. Shanon index, Nie index and observed heterozygosity were 0.59, 1.67 and 0.32 respectively. On the basis of obtained results it was revealed that the Pit1 gene had high degree of polymorphism which can be considered for future breeding programs.