بررسي بيوشيميايي و هيستوپاتولوژيك آثارواكسن چهارتايي انتروتوكسمي در موش سوري

Histopathological and biochemical evaluation of tetravalent enterotoxemia vaccine effects in balb/C

يكي از مهم ترين تست هاي كنترلي در مورد واكسن انتروتوكسمي تست توكسيسيتي (سنجش باقيمانده توكسين) است. ارزيابي اين تست به صورت باليني بوده و فاكتور تلفات در موش هاي تزريق شده ملاك قضاوت مي باشد. هدف اين مطالعه ارزيابي تست كنترلي توكسيسيتي در سطوح باليني و هيستوپاتولوژيك و همچنين ارزيابي آثار واكسن انتروتوكسمي روي فاكتورهاي بيوشيميايي سرم از جمله گلوكز خون، اوره و كراتين بوده است. در اين بررسي 21 سر موش سوري با ميانگين وزن 25 گرم به طور تصادفي به 3 گروه جداگانه شامل گروه 1 (واكسن)، گروه 2 (كنترل) و گروه 3 (محيط كشت) دسته بندي شدند. همه موش ها قبل و بعد از تزريق از نظر فاكتورهاي باليني سلامت و تلفات كنترل شدند. گروه 1 و 3 به ترتيب واكسن انتروتوكسمي و محيط كشت پايه واكسن را به ميزان 5/0 ميلي ليتر به روش زيرجلدي دريافت و گروه 2 به عنوان گروه كنترل هيچ ماده اي دريافت نكردند. پس از 48 ساعت خونگيري انجام شد و ارزيابي بيوشيميايي فاكتورهاي خوني روي سرم انجام گرديد. سپس هر سه گروه كالبد گشايي شده و نمونه برداري جهت مطالعات هيستوپاتولوژيك انجام گرديد. نتايج هيستوپاتولوژيك نشان داد بافت مغز در گروه واكسن (به جز دو مورد) و گروه شاهد (به جز يك مورد) و گروه محيط كشت (به جز يك مورد) دچار گليوز كانوني شده است. بافت كبد در همه موارد گروه واكسن و در 6 نمونه گروه شاهد مبتلا به هپاتيت لنفوسيتي خفيف و نكروز و دژنره شدن خفيف سلول هاي كبدي بوده، در گروه محيط كشت كبد در 4 مورد طبيعي و بقيه دچار ضايعاتي شبيه گروه 1 و 2 بوده اند. كليه ها نيز در همه گروه ها به جز يك مورد در گروه واكسن و دو مورد در گروه محيط كشت، همگي درجاتي از تغييرات اپيتليالي خفيف را نشان دادند. قلب، طحال، روده و ريه ها در همه گروه ها سالم بودند. جهت تجزيه و تحليل نتايج هيستوپاتولوژيك از آزمون دقيق فيشر استفاده گرديد. جهت تجزيه و تحليل داده هاي بيوشيميايي از نرم افزار آماري Stata10، آزمون آماري آناليز واريانس يك طرفه و آزمون تكميلي (post hoc) شفه (scheffe) استفاده گرديد. در تحليل نتايج هيستوپاتولوژيك تفاوت معني دار آماري بين گروه هاي مختلف مشاهده نگرديد. تحليل داده هاي بيوشيميايي نشان دادند كه تفاوت معني داري بين مقدار گلوكز خون در گروه 1 با گروه هاي 2 و 3، همچنين بين مقدار اوره در گروه 1 با 3 وجود دارد (05/0 > p). بر اساس نتايج اين مطالعه تزريق واكسن در موش باعث ضايعه اي مرتبط با واكسن نمي شود. با توجه به نتايج باليني، هيستوپاتولوژيك و بيوشيميايي نتيجه گيري مي شود كه فرايند توليد واكسن با دقت و به درستي انجام و تبديل توكسين به توكسوييد كه فاقد قدرت بيماريزايي است به خوبي انجام شده است و روش تست و كنترل واكسن بدون اشكال بوده است.

Clostridium perfringens, one of the most important pathogens is the main causative agent of enterotoxemia in farm animals. Vaccination is the most effective prevention method against diseases caused by Clostridium Perfringens. One of the most important testes regarding vaccine quality control is toxicity test (measuring residual toxin). The evaluation of test results was done regarding to clinical factors and mortality rate of mice that received vaccine. The present study was aimed to evaluate the toxicity test of enterotoxemia vaccine clinically, histopathologically and biochemically (BS, BUN and creatine) examinations. In this study, 21 Balb/C mouse with an average weight of 25 grams were used and divided into 3 equal groups Including group 1 (vaccine), group 2 (control) and group 3 (culture medium). Health factors and mortality rate of all mice was checked before and during the survey. Groups 1 and 3 received 0.5 ml enterotoxaemia vaccine and culture medium (without bacterium) subcutaneously, respectively and group 2 (control) did not receive any material. After 48 hrs blood sampling was done and blood biochemical factors were evaluated. Finally, animals were necropsied and histopathological studies on 3 groups were performed. The stata10 software and Anova and scheffe tests were used for Statistical analysis. For analysis of histopathological results, Fisher test were used. Histopathological results showed focal gliosis in brain tissue in the vaccinated group (except in two cases), control group (except one) and culture medium group (except one). Liver tissues had mild lymphocytic hepatitis and mild hepatocellular degeneration and necrosis in all samples of vaccinated group, 6 samples of control group and 3 samples of culture medium group. Kidneys in all groups showed a mild degree of epithelial changes except of 1 case in vaccinated group and 2 cases in culture medium group. Heart, spleen, intestine and lungs were normal in all groups. Results showed no significant difference between groups. Also, biochemical Results showed a significant difference in amount of BS between group 1 and groups 2 and 3, as well as the amount of urea between group 1 and 3 (P < 0.05). The results of the study indicate that enterotoxemia vaccine didn’t cause a significant injury in tested mice.