بررسي فراواني موتاسيون ژن PA3721 در سويه هاي سودوموناس آيروژينوزا توليدكنندهESBL و فاقدESBL با روش PCR

Study of Mutation Frequency in PA3721 Gene among Producing and Non-producing ESBLs Pseudomonas aeruginosa Strains by PCR method

مقدمه: بعضي از سويه هاي سودوموناس آيروژينوزا، بتالاكتامازهاي طيف وسيع را توليد مي كنند كه باعث مقاومت به سفالوسپورين هاي طيف وسيع مانند سفو تاكسيم، سفترياكسيون، سفتازيديم و هم چنين مونوباكتام هايي از قبيل آزترونام مي شوند. يكي از عوامل ايجادكننده مقاومت در برابر آنتي بيوتيك ها در سويه هاي سودوموناس آيروژينوزا افزايش بيان پمپ هاي تراوشي است، كه از مهم ترين اين پمپ ها مي توان پمپ MexAB-OprM را نام برد. مواد و روش ها: به منظور تشخيص فراواني موتاسيون ژنPA3721، 50 سويه سودوموناس آيروژينوزاي جدا شده از عفونت هاي ادراري در بيمارستان هاي آموزشي درماني شهر ايلام و بيمارستان ميلاد تهران مورد مطالعه قرار گرفتند. باكتري ها با روش هاي بيوشيميايي تاييد شدند و با استفاده از ديسك ديفيوژن، حضور آنزيم هاي بتالاكتاماز غربالگري شدند. سپس با استــفاده از ديسك هاي تركيبي، وجود آنزيم هاي بتالاكتاماز با طيف وسيع تاييد گرديد، و در نهايت ژن هاي برخي از آنزيم هاي بتالاكتاماز طيف گسترده با روش PCR بررسي شدند. جهت بررسي فراواني موتاسيون ژن PA3721 در سويه هاي توليد كنندهESBL و سويه هاي فاقد ESBL، نيز از روش PCR استفاده گرديد. يافته هاي پژوهش: در اين مطالعه 50 سويه مورد مطالعه قرار گرفت كه 18 سويه از بيمارستان ميلاد تهران و 32 سويه از بيمارستان هاي آموزشي درماني ايلام تهيه گرديد. در نمونه هاي جمع آوري شده از بيمارستان ميلاد تهران، وجود ژن هاي PSE، VEB و PER، و در نمونه هاي جمع آوري شده از بيمارستان هاي ايلام، بررسي ژن هاي OXA10 قبلا مورد مطالعه قرار گرفته بود. در 32 نمونه شهر ايلام كه 17 نمونه از آن ها توليد كننده بتالاكتاماز طيف وسيع بودند، همگي داراي ژن oxA-10 بودند و در بين آن ها موتاسيون ژن PA3721 در 8 نمونه(05/47 درصد) مشاهده گرديد. بحث و نتيجه گيري: با توجه به نتايج اين بررســــي در شــــرايط in vitro، مــروپنم روي بيشتـــــر سويه هاي سودوموناس آيروژينوزا مورد مطالعه اثر گذاشت. نتايج مطالعه نشان داد كه موتاسيون ژن PA3721 بيشتر در ميان سويه هاي توليدكننده بتالاكتاماز طيف وسيع كه واجد ژن oxA-10 هستند، ديده مي شود.

Introduction: Some Pseudomonas aerugin-osa strains produce Extended Spectrum Beta Lactamase which causes resistance to cephalosporins such as cefteriaxon, cefota-xim, ceftazidim and also monobactams such as azteronam. Over expression of efflux pumps including MexAB-OPRM is a factors which play an important role in resistance of Pseudomonas aeruginosa strains to antibiotics. Materials & Methods: In order to detect the mutation frequency in PA3721 gene, 50 isolates of Pseudomonas aeruginosa isola-ted from urinary tract infection in Emam Khomeini Hospital of Ilam and Milad Hospital in Tehran were studied. The isolates were confirmed by biochemical methods and the Extended Spectrum Beta Lactamase were screened by disk diffusion method. Phenotypic confirmatory test by combined disk was utilized for confirma-tion of ESBLs. In next step, ESBLs genes as well as mutation in frequency PA3721 gene in producing and non producing ESBLs Pseudomonas aeruginosa strains were identified by PCR method. Findings: In this study, 50 isolates were studied, including 18 isolates from Milad Hospital and the rest from Ilam Hospitals. In Milad Hospital, ESBLs genes for PER, PSE and VEB and in Ilam Hospitals ESBL gene for OxA-10 were detected. In Ilam samples including 32 isolates of which 17 samples produced ESBLs, all carried oxA-10 gene and 8 isolates (47/05%) were positive for mutation in PA3721 gene. Discussion & Conclusion: According to the results, Meropenem was more effective against Pseudomonas aeruginosa isolates in in vitro condition. The results also showed that nearly half of oxA-10 producing Pse-udomonas aeruginosa isolates carry nalC gene.