مطالعه و ارزيابي استفاده از لنتي ويروس ها به عنوان حامل هاي انتقال دهنده ژن در سلول هاي فيبروبلاست انساني (HDFs)

The assessment of lentiviral vectors appliction for gene transformation in human dermal fibroblasts (HDFs)

زمينه و هدف: سلول هاي بنيادي پرتوان القايي Induced pluripotent stem cells= iPSc)) سلول هاي اوليه و تمايز نيافته اي هستند كه قادر به ايجاد تقريباً هر نوع سلولي در بدن مي باشند. هدف از پژوهش حاضر توليد و استفاده موثر از وكتور لنتي ويروسي TetO-FUW-OSKM جهت انتقال ژن ها به سلول هاي فيبروبلاست انساني ((Human fibroblast cells= HDFs و در نهايت ارزيابي عملكرد اين وكتور بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي پس از جداسازي و كشت سلول هاي HDF، وكتور لنتي ويروسي TetO-FUW-OSKM (به عنوان پلاسميد انتقال دهنده) حاوي ژن هاي برنامه ريزي مجدد همراه با پلاسميدهاي PsPAX2 و PMDG2 (به عنوان پلاسميدهاي كمكي لازم براي بسته بندي ويروس) به لاين سلولي HEK-293T جهت توليد ويروس ها ترانسفكت شدند. محيط رويي سلول هاي HEK-293T حاوي ويروس هاي توليد شده پس از 48 و 72 ساعت برداشت شد و اين ويروس ها جهت برنامه ريزي مجدد سلول هاي HDF به اين سلول ها ترانس داكت گرديدند. يافته ها: نتايج اين مطالعه نشان دهنده توليد موفقيت آميز وكتور لنتي ويروسي TetO-FUW-OSKM، كارايي موثر روش انتقال ژن با استفاده از وكتورهاي لنتي ويروسي و بيان مناسب فاكتورهاي رونويسي در سلول هاي HDF پس از ترانس داكشن بود. نتيجه گيري: با توجه به اين يافته ها مي توان از وكتورهاي لنتي ويروسي جهت انتقال ژن و برنامه ريزي مجدد سلول هاي بالغ از قبيل HDF در مطالعات بعدي و توليد سلول هاي iPS استفاده كرد.

Background and aims: Induced pluripotent stem cells (iPSC) are primary, undifferentiated cells that are able to create almost any type of cells in the body. The purpose of the present study was to produce and transmit TetO-FUW-OSKM lentiviral vector to human dermal fibroblast cells (HDFs) and to investigate the application of this vector. Methods: In this experimental study after isolation and culture of HDF cells, TetO-FUW-OSKM lentiviral vector (as transfer vector) containing the reprogramming genes and PsPAX2 and PMDG2 vectors (as packaging plasmids) were transfected to HEK-293T cell line for virus production. The supernatants of packaging cells were harvested 48 h and 72 h after transfection. Then, these viruses were transducted to HDF for reprogramming these cells. Results: The results of this study demonstrated successful production of TetO-FUW-OSKM lentiviral vector, efficiency of transmission method of gene via lentiviral vectors, and suitable expression of the transcription factors in HDF cells after transduction. Conclusion: According to these findings lentiviral vectors could be used for gene transmission and reprogramming of adult cells such as HDF in future studies and to generate iPS cells.