ساخت كتابخانه ي آنتي بادي تك دمين شتري بر ضد آنتي ژن هاي سلولي سرطان سينه

Construction of single domain camel antibody library against breast cancer cellular antigens

زمينه و هدف: نواحي متغير آنتي‌بادي‌هاي زنجيره سنگين شتري (VHH يا نانوبادي)، كوچك ترين واحد باند شونده به آنتي ژن ها هستند. اندازه كوچك نانوبادي ها بزرگ ترين مزيت آن ها مي باشد كه سبب دستكاري ژنتيكي راحت آن ها مي شود. اين مطالعه با هدف ساخت كتابخانه ي آنتي بادي تك دمين از شتر ايمن شده با يك رده سلولي آدنوكارسينوماي سينه ي انسان (SKBR3) طراحي و اجرا شد. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي ابتدا عصاره سلول SKBR3 طي سه نوبت به صورت زير پوستي به يك شتر تزريق گرديد. سپس RNA كامل از طحال شتر استخراج و قطعات VHH به كمك روش RT-PCR ساخته و تكثير شدند. قطعات VHH در درون فاژميد Pcomb3x قرار گرفتند و به روش الكتروپوريشن قطعات نوتركيب وارد باكتري هاي DH5? شدند. تنوع كتابخانه ي تهيه شده توسط تكنيك انگشت نگاري آنزيمي مورد بررسي قرار گرفت و در نهايت بيان VHH با روش SDS-PAGE ارزيابي شد. يافته ها: در اين پژوهش كتابخانه آنتي بادي شتري با بيش از 105 كلوني ساخته شد. همچنين انگشت نگاري آنزيمي نشان داد كه كتابخانه ي آنتي بادي حاصل داراي تنوع بالايي مي باشد. بررسي هاي اوليه بوسيله SDS-PAGE مشخص كرد كه پروتيين VHH با وزن مولكولي 15 كيلو دالتون در باكتري هاي ترانسفورم شده بيان مي شود. نتيجه گيري: تهيه ي كتابخانه ي آنتي بادي ايمن بر ضد رده سلولي SKBR3، امكان جداسازي آنتي بادي هاي اختصاصي VHH بر ضد آنتي ژن هاي مختلف سرطان سينه را فراهم مي كند.

Background and aims: VHH (Nanobody) is a camel antibody and is the smallest unit binding to antigen. The small size of nanobodies is the greatest advantage that makes easy genetic manipulation of them. The main aim of this study was construction of a single domain antibody library from camel immunized with human breast adenocarcinoma-SKBR3 cell line. Methods: At first, in this experimental study, SKBR3 cell extract was subcutaneously injected to a camel in three rounds. Then, total RNA was extracted from spleen of camel and VHH fragments synthesized and amplified using RT-PCR method. The VHH fragments were inserted into Pcomb3X phagemid and recombinant constructs were electroporated into DH5? bacteria. Diversity of provided library was studied by enzymatic fingerprinting techniques. Finally, VHH expression was analyzed by SDS-PAGE. Results: In this study, a camel antibody library with 105 colonies was constructed. Also, the enzymatic fingerprinting showed a high diversity in this antibody library. Primary studies by SDS-PAGE showed that VHH protein with a molecular weight of 15 kDa is expressed in transformant bacteria. Conclusion: Providing an immune antibody library against SKBR3 cell line makes an option for isolation of specific VHH antibodies against different breast cancer antigens.