تشخيص سريع حساسيت به اتامبوتول در سويه‌هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس ايزوله شده از بيماران مسلول با روش مولكولي PCR-RFLP

RAPID DETECTION OF SUSCEPTIBILITY TO ETHAMBUTOL IN CLINICAL MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS ISOLATED FROM TUBERCULOSIS PATIENTS BY PCR- RFLP

پيش زمينه و هدف: اتامبوتول يكي از داروهاي كليدي جهت درمان بيماري سل بوده و بروز مقاومت به آن به صورت فزاينده‌اي گزارش مي‌شود. در مطالعه حاضر روش Polymorphism) (Restriction Fragment Length PCR-RFLP در شناسايي سريع مقاومت سويه‌هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس نسبت به اتامبوتول مورد بررسي قرار گرفته است. روش بررسي: در اين مطالعه از127 سويه مايكوباكتريوم توبركلوزيس در مركز تحقيقات سل اراك، 60 سويه انتخاب و مورد بررسي قرار گرفتند. جداسازي DNA با استفاده از روش Chelex100انجام گرديد. PCR با كمك پرايمرهاي اختصاصي براي آمپلي فيكاسيون قطعه bp167 ژن embB اجرا گرديد. محصول PCR با كمك آنزيم‌هاي HaeIII و NlaII مورد RFLP قرار گرفت و الگوي باندها تعيين شد. قطعه مورد نظر در تعدادي از نمونه‌ها تعيين ترادف (سكوينس) شده و به‌عنوان استاندارد طلايي با روش ارايه شده مقايسه گرديد. يافته‌ها: از 60 سويه مورد مطالعه، 43 سويه از نظر فنوتيپي مقاوم به اتامبوتول و 17 سويه حساس به اين دارو بودند. انجام PCR، باند 167 را ارايه نمود كه نشان‌دهنده انتخاب صحيح پرايمرها و تعيين برنامه مناسب آمپلي فيكاسيون بود. از 43 سويه مقاوم، 19 سويه با روش RFLP داراي موتاسيون در كدون ATG-Met 306 و 24 سويه غير موتان تشخيص داده شدند. تمامي 17 سويه حساس، غير موتان بودند. اين روش براي تعيين سويه حساس داراي حساسيت و ويژگي 100درصد مي‌باشد. نتايج تعيين توالي، انطباق كامل با نتايج PCR-RFLP را نشان داد. نتيجه گيري: نتايج مطالعه حاضر نشان مي‌دهد كه روش PCR-RFLP مي‌تواند به عنوان يك روش ساده و سريع براي تعيين حساسيت به اتامبوتول در سويه‌هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس مورد استفاده قرار گيرد

Background & Aims: Eethambutol is a key drug to treatment of tuberculosis; and resistance against it has been increasingly reported. In this study, Polymerase Chain Reaction -Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method in rapid detection of tuberculoses mycobacterium strains against the ethambutol has been investigated. Materials & Methods: This study was conducted on 60 strains that were selected from 127 strains in Tuberculosis and Pediatric Infections Research Center. DNA was extracted by Chelex 100 method. PCR test was performed using specific primers for embB gene. Digestions of PCR products with HaeIII and NlaII restriction enzymes, then the pattern of restriction fragments generated were analyzed. The section was sequenced in a few samples, and it was compared to the presented method as golden standard. Results: Out of 60 studied stains, 43 were phenotypically resistant to ethambutol, and 17 were sensitive. PCR revealed that the band 167 showed the correct selection of primers and the appropriate plan of amplification. Out of 43 resistant strains, 19 stains were diagnosed to have mutation in ATG-Met codon 360 using RFLP method, and 24 were found to be non-mutant. Conclusion: According to the findings, that PCR-RFLP can be a simple and rapid method to diagnose the ethambutol -sensitivity in tuberculosis mycobacterium strains. Keywords: Ethambutol, Mycobacterium Ttuberculosis, PCR- RFLP