بررسي تاثير افزايش بيان miR-29b1 بر القاي آپوپتوز در سلول‌هاي لوسمي رده سلولي HL60

Effect of overexpression of miR-29b1 on induction of apoptosis in leukemic HL60 cell line

زمينه: ريزRNAها، مولكول هاي كوچك تنظيمي غير رمز كننده هستند كه نقش هاي مهمي را در فرآيندهاي مختلف زيستي همچون تكثير، تمايز و آپوپتوزيس ايفا مي‌كنند. كاهش بيان miR-29b1 در بسياري از سرطان هاي انساني، نشان دهنده نقش مهم اين مولكول در تكامل بافتي و سرطان است. از آنجايي كه القاي آپوپتوزيس در سلول هاي سرطاني شاخص مهمي در درمان آن‌هاست، در اين مطالعه تاثير افزايش بيان miR-29b1 با استفاده از ساختار لنتي ويروسي بر القاي آپوپتوز در رده سلولي پروميلوتيك HL60 مورد بررسي قرار گرفته است. مواد و روش‌ها: افزايش بيان پايدار miR-29b1 با استفاده از ساختار لنتي ويروسي حاوي توالي پيش ساز miR-29b1 حاصل شد. سپس سلول هاي HL60 تحت تيمار ويروس قرار گرفتند. پس از 48 و 72 ساعت اثر آپوپتوتيك اين miRNA، با استفاده از آزمون MTT، رنگ‌آميزي با اتيديوم برومايد و آكريدين اورنج، سنجش ميزان كاسپاز 3 و فلوسايتومتري انكسين مورد سنجش قرار گرفت. يافته‌ها: نتايج با نرم افزار آماري SPSS ويرايش 13 و آزمون آماري t-test آناليز شدند. مطابق انتظار، افزايش بيان miR-29b1 باعث افزايش در القاي آپوپتوزيس گرديد، به گونه اي كه آپوپتوزيس در گروه آزمون در مقايسه با گروه كنترل حدود 3 برابر افزايش نشان داد. آناليز داده ها نشان از معني دار بودن اين افزايش نسبت به گروه كنترل بود (05/0 > P). نتيجه گيري: بر اساس يافته‌هاي اين بررسي، miR-29b1 مي تواند آپوپتوزيس را در رده سلوليHL60 القا كند. تحريك آپوپتوزيس به‌وسيله miRNAها مي تواند يكي از بهترين و مناسب ترين راه ها براي القاي مرگ در سلول هاي سرطاني باشد. نتايج به دست آمده از نقش سركوب‌گري تومور miR-29b1 حمايت مي كند، به گونه‌اي كه miR-29b1 صناعي مي تواند در آينده به عنوان يك درمان اپي‌ژنتيك جديد به-كار رود.

Background: MicroRNAs are small non-coding regulatory molecules that are involved in diverse biological processes such as proliferation, differentiation and apoptosis. Down regulation of miR-29b1 has been found in some of cancers that indicate important roles of this molecule in histological development and cancer. Whereas induction of apoptosis in cancer cells is important for their therapy, in this study, our goal was to examine the effect of miR-29b1 over-expression on apoptosis using the lentiviral structure in HL60 cell line. Materials and methods: Permanent overexpression of miR-29b1 was established using a lentiviral vector construct containing the precursor of miR-29b1 sequence. Then, HL60 cells treated by miR-29b1 lentivirus. 48 and 72 hours after transduction, cell proliferation inhibition was estimated by MTT assay. Detection of apoptotic cells was evaluated by EtBr/AO double staining technique and flow cytometry using Annexin V and Caspase-3 activity was measured by caspase-3 colorimetric activity assay. Results: Data analysis was done with SPSS 13 softwer and t-test. According to our results, overexpression of miR-29b1 led to increase apoptosis. As apoptosis in the test group compared with the control group showed about 3-fold increase. Data analysis showed a significant increase compared to the control group (P < 0.05). Conclusion: According to findings of present study, miR-29b1 can induce apoptosis in HL60 cell line. Apoptosis stimulation by miRNAs is probably one of the best and applicable ways to induce death in cancer cells. These data support a tumor suppressor role of miR-29b1, synthetic miR-29b1 might be used as a novel epigenetic therapy in future.