تشخيص مولكولي باكتري مولد بروسلوز، جداشده از بيماران مبتلا به تب مالت توسط بررسي ژن‌هايomp25 و trpE با كمك PCR

Molecular diagnosis of brucellosis-causing bacteria isolated from patients with brucellosis with the help of trpE and omp25 genes by PCR

مقدمه و هدف: بيماري تب مالت يا بروسلوز، نوعي بيماري مشترك ميان انسان و دام است. امروزه براي تشخيص بروسلوز، چندين تست سرولوژيك وجوددارند كه انجام هريك از اين تست‌ها با محدوديت‌هايي همراه است. هدف از اين مطالعه، استفاده از PCR با توجه به ژن‌هاي omp25 و trpE به‌منظور بررسي مولكولي درافراد مبتلا به بروسلوز است. مواد و روش‌ها: در تحقيق حاضر، 30 سويه كلينيكي مورد بررسي قرارگرفتند. تمام افراد مورد مطالعه داراي تست‌هاي ايمونولوژيك مثبت ازقبيل رايت و كومبس‌رايت بودند. نمونه‌ها در محيط كشت خون (BACTEC) و دماي37 درجه سيليسيوس به‌مدت پنج روز انكوبه و پس از آن روي محيط بروسلا آگار به‌مدت سه روز كشت‌داده‌شدند؛ از كلني‌هاي حاصل براي استخراج DNA توسط كيت استفاده‌شد. DNA استخراج‌شده به‌عنوان الگو براي تشخيص دقيق سويه‌هاي باكتريايي با كمك پرايمرهاي اختصاصي ژن‌هاي omp25 و trpE در واكنش PCR مورد استفاده قرارگرفت. نتايج: نتايج حاصل از واكنش تكثير و وجود باندهاي 486 و 490 جفت بازي مربوط به ژن‌هاي omp25 و trpE نشان‌دهنده صحت پرايمرهاي طراحي‌شده بود؛ با تكثير اين قطعات جنس باكتري بروسلا به‌صورت اختصاصي شناسايي‌شد. نتيجه‌گيري: نتايج اين مطالعه نشان‌مي‌دهند كه با تكثير نواحي خاص از ژن‌هاي omp25 و trpE كه جز ژن‌هاي حفاظت‌شده جنس بروسلا هستند، شناسايي باكتري بروسلا توسط روش PCR امكان‌پذير خواهدبود.

Background and Objective: Brucellosis is a zoonotic disease in humans and animals. Nowadays, several serological tests for brucellosis diagnosis are available but all of these tests have their own limits. The aim of the present study was to use PCR according to omp25 and trpE genes for the molecular analysis of the individuals with brucellosis. Materials and Methods: In this study, 30 clinical isolates were studied. All the patients were diagnosed with positive immunological tests such as Wright and Coombs. Samples of blood were cultured (BACTEC) and incubated at 37 degrees Celsius for 5 days and then they were cultured for 3 days on Brucella agar. DNA was extracted from the colonies by Kit. The extracted DNA was used as template for accurate diagnosis of bacterial strains with gene-specific primers in PCR reactions omp25 and trpE. Results: In this study, all the samples selected were seropositive from which the colonies were obtained. DNA extracted from the colonies by the use of kit was proved by spectrophotometer device. Also, the results of the amplification reaction and the amplified bands of 486 and 490 bp for omp25 and trpE genes indicate the validity of the primers. By reproduction of these components, the genus Brucella was specifically identified. Conclusion: Using the PCR technique, on the contrary to the serological diagnostic methods, facilitates the tracing and identifying the bacteria, especially those with slow growth rate. In this research, the trpE gene which has been not used in the diagnosis of brucellosis in Iran was exploited. The results of this study indicate that by amplification of some specific regions of the omp25 and trpE genes which are belonged to the conserved parts of the genus Brucella, identifying the bacteria Brucella under PCR method is possible.