استخراج DNA مادري و جنيني از تخم مرغ جهت تعيين ژنوتيپ هاي ريزماهواره

Extraction of Maternal and Embryonic DNA from the Egg and Its Application in Microsatellite Genotyping

مطالعات ژنتيك ملكولي تاثير بسزايي بر دانش ما از روند هاي تكاملي و بوم شناختي موجودات، آناليز ژنتيك جمعيت ها و ارتباطات فيلوژنتيك آن ها دارد. استفاده از تخم به عنوان منبع ماده ژنتيكي يكي از روش هاي غير تهاجمي نمونه گيري بوده و در طيف وسيعي از گونه هاي تخم گذار كاربردي است. هدف از مطالعه حاضر معرفي يك روش مناسب براي استخراج DNA مادري (از پوسته) و جنيني (از بلاستودرم) از يك تخم مرغ است. 150 نمونه شامل 70 نمونه پوسته، 70 نمونه بلاستودرم و 10 نمونه خون مربوط به طيور لگهورن بررسي شد. كارايي فرايند استخراج DNA با استفاده از ماركر ريز ماهواره LEI0258 مورد ارزيابي قرار گرفت. اين ريزماهواره جهت تايپينگ MHC به كار ميرود. علاوه بر اين، براي بررسي تطابق DNA استخراج شده از پوسته با DNA مادري، ژنوتيپ هاي بدست آمده از نمونه هاي خون مادر و پوسته تخم مرغ ها با يكديگر مقايسه شدند. DNA جنيني از تمامي نمونه هاي بلاستودرم و DNA مادري در 78% پوسته ها با موفقيت جدا شد. ما توانستيم تا روز 3 انكوباسيون DNA مادري و جنيني را به طور جداگانه از يك تخم مرغ استخراج كنيم. در روزهاي بعد DNA مادري موجود در پوسته به DNA جنيني آلوده شده بود. نتايج اين تحقيق نشان مي دهد كه روش استخراج از يك تخم مرغ مي تواند بطور موفقيت آميزي براي بدست آوردن ماده ژنتيك مادر و جنين در طيور استفاده شود.

Studies in molecular genetics are having a great influence on our knowledge regarding the genetic analysis of the populations, phylogenetic relationships, and evolution and ecology of organisms. The use of the egg as a source of genetic material is a non-invasive sampling method that is applicable in a wide range of oviparous species. The aim of this study was to present an efficient method for extracting maternal (from egg shell) and offspring (from blastoderm) DNA from a single egg. One hundred and fifty specimens from Leghorn population (including 70 eggshells, 70 blastoderms, and 10 blood samples) were analyzed. The success of the DNA extraction was investigated using the LEI0258 microsatellite marker. This microsatellite is used for MHC genotyping. Furthermore, maternal and egg shell DNA correspondence was investigated by comparing the genotypes obtained from eggshells and blood samples. Offspring and maternal DNA was successfully extracted from all blastoderms and 78% of eggshells, respectively. We were able to obtain both offspring and maternal DNA from a single egg until 3 days of incubation but after that, the embryo’s DNA contaminated the maternal DNA present in the shell. Our results showed that the single-egg method could be successfully used for maternal and offspring DNA extraction in chicken.