بررسي شايستگي داده‌هاي روش دابل ساندويچ الايزا براي تشخيص توكسين بوتولينوم تيپ E

Evaluation of Data Competency Achieved from Double Sandwich ELISA Method for the Detection of Botulinum Toxin Type E

مقدمه: توكسين بوتولينوم به عنوان قويترين توكسين معرفي شده و مقدار اندك آن موجب مرگ افراد مي‌شود، بنابراين روش تشخيصي كه بتواند توكسين بوتولينوم را سريع و دقيق شناسايي نمايد، بسيار اهميت دارد. اين مطالعه با هدف، بررسي روش اصلاح شده دابل ساندويچ الايزا از نظر حد تشخيص، تكرار پذيري و واكنش متقاطع براي تشخيص توكسين بوتولينوم تايپ E انجام شد. مواد و روش‌ها: در روش دابل ساندويچ الايزا به دو آنتي بادي كه به اپيتوپ‌هاي بدون تداخل روي آنتي ژن متصل مي‌شوند، نياز است. براي اين منظور، آنتي بادي خرگوشي در پايين (آنتي بادي پذيرنده،Capture antibody ) و آنتي بادي موشي در بالاي توكسين(آنتي بادي شناساگر،Detection antibody ) درون هر چاهك ريخته شده و توكسين از چاهك اول تيتر گرديد.سپس، براي تنظيم و بهينه كردن سيستم ساندويچ الايزا آزمايشات تكرار پذيري و واكنش متقاطع انجام شد. يافته‌ها: روش دابل ساندويچ الايزا قادر به شناسايي مقدار 1 نانوگرم توكسين بوتولينوم تيپ E مي‌باشد. در اين مطالعه تجربي، شايستگي دادههاي اين روش بررسي شد كه نتايج آن نشان داد تكرار پذيري از طريق سه بار تكرار آزمايش در يك روز و چهار بار تكرار آزمايش در روزهاي مختلف، مطلوب و واكنش متقاطع آن با تيپ B و توكسين تتانوس ناچيز بود. نتيجه‌گيري: تاكنون، روشهاي مختلفي براساس سنجش سرولوژيكي توكسين بوتولينوم ارايه شده است؛ اما در اين بين روش الايزا، بهترين و كاربردي ترين روش بوده است. براي بهبود حساسيت سنجش، روشهاي تغيير يافته الايزا مطرح شده است كه پيشرفته ترين آنها روش دابل ساندويچ الايزا است. اين روش سريع، بسيار اختصاصي و حساسيتي معادل آزمايش روي موش آزمايشگاهي دارد. اين روش براي تعيين آنتي ژن خاص در نمونه مجهول كاربرد دارد.

Background: Botulinum toxin is known as the most potent toxin that that can cause death even in small amounts, on the other hand, except antitoxin, there are no drug for toxicity. Therefore, diagnostic methods that can detect very small amounts of botulinum toxin in a short time, are very important. The aim of this study was to evaluate the modified double sandwich ELISA method for detection limit, repeatability and cross-reactivity for the detection of botulinum toxin type E. Materials and Methods: Double-sandwich ELISA method require two antibodies that bind to epitopes without interference on antigens. For this purpose, we poured the rabbit antibody at down (Capture antibody) and mouse antibody at high toxin (Detection antibody) into the each wells and titered toxin from the first well. Then, for adjusting and optimizing the sandwich ELISA system Cross reactivity and Reproducibility tests were performed. Results: Double-sandwich ELISA method is able to detect value of 1 ngbotulinum toxin type E.Reproducibility of this method was optimum through experiments repeated three times in one day and four times in different days and is negligible cross itʹs reactivity with toxin type B and Tetanus was insignificant. Conclusion: So far, several methods based on serological assessment of botulinum toxin have been presented, but ELISA, has been the best and most practical method. To improve sensitivity of assessment, several modified ELISA methods have been presented that double-sandwich ELISA is the most advanced one . This method is rapid, highly specific and itʹs sensitivity is equivalent to testing on mice. The method is used for determining specific antigen in the unknown sample.