بررسي كلوني‌زايي سلول‌هاي اسپرماتوگوني منجمد- ذوب شده بره قزل پس از هم كشتي با سلول‌هاي سرتولي

Evaluation of Freeze-Thawed Ghezel ram’s spermatogonial cells colonization after co-culture with sertoli cells.

اسپرماتوژنز فرآيندي پيچيده، هماهنگ و وابسته به سلول‌هاي بنيادي به نام سلول‌هاي اسپرماتوگوني است. تحقيقات محدودي بر روي كشت سلول‌هاي بنيادي اسپرماتوگوني گوسفند صورت گرفته است. در اين بررسي 5-3 نمونه بافتي اتوپسي شده از بيضه بره هاي نر 2 ماهه نژاد قزل پس از دو مرحله هضم آنزيمي، به چهار گروه تقسيم گرديد: گروه 1: همكشتي سلول‌هاي اسپرماتوگوني و سرتولي فريز شده روز صفر پس از ذوب به مدت 10 روز، گروه 2: همكشتي سلول‌هاي اسپرماتوگوني و سرتولي فريز شده در روز چهاردهم كشت پس از ذوب به مدت 10 روز، گروه 3: ذوب سلول‌هاي اسپرماتوگوني فريز شده ي روز صفر و كشت به مدت 10 روز، گروه 4: ذوب سلول‌هاي اسپرماتوگوني فريز شده در روز چهاردهم كشت و كشت به مدت 10 روز و گروه كنترل: همكشتي سلول‌هاي اسپرماتوگوني و سرتولي تازه روز صفر به مدت چهارده روز. ميزان كلوني‌زايي و قطر كلوني‌ها در طول اين ده روز مورد ارزيابي قرار گرفت. در گروه‌هاي 3 و 4 هيچ كلوني ديده نشد اما در گروه 1 ميزان كلوني‌زايي بالاتري از گروه 2 مشاهده گرديد (P < 0.05). مي‌توان نتيجه گرفت انجماد سلول‌هاي اسپرماتوگوني گوسفند راهي مناسب براي حفظ طولاني مدت آنها است و اين سلول‌ها پس از ذوب توان كلوني‌زايي خود در محيط آزمايشگاه را حفظ مي‌كنند. بهترين زمان براي انجماد سلول‌هاي اسپرماتوگوني گوسفند، روز صفر بعد از هضم آنزيمي است و كشت اين سلول‌ها پيش از انجماد باعث كاهش قدرت كلوني‌زايي آنها مي‌گردد.

Spermatogenesis is a complex and coordinated process that is dependent upon the type of stem cells known as spermatogonial stem cells. Few studies on culture of sheep spermatogonial stem cells are available. In this study, 3-5 tissue samples autopsied from testis of 2 month old male Ghezel rams after two stages of enzymatic digestion were divided into four groups: Group 1: ’Spermatogonial cells co-cultured with sertoli cells for 10 days, freeze-thawed in day 0’; group 2: ‘Spermatogonial cells co-cultured with sertoli cells for 10 days, freeze-thawed in day 14’; group 3: ‘Freeze-thawed spermatogonial cells in day 0 cultured for 10 days’; group 4: ’Freeze-thawed spermatogonial cells in day 14 cultured for 10 days’ and control group: ‘Spermatogonial cells co-cultured with day 0 fresh sertoli cells for 14 days’. The rate of colonization and colonies diameter were evaluated during these 10 days. Groups 3 and 4 did not show any signs of colony whereas in group 1 a higher rate of colonization was observed comparing to group 2 (P < 0.05). It can be concluded that freezing ram’s spermatogonial cells is a proper way for their long-term preservation and after thawing these cells maintain their colonization ability in vitro. The best time for freezing sheep spermatogonial cells is after enzymatic digestion (day 0) and culturing the cells prior freezing leads to a decrease in their colonization ability.