كلونينگ ژن 40P مايكوپلاسما آگالاكتيه در سيستم پروكاريوتي

Cloning of Mycoplasma agalactiae P40 gene in prokaryotic system

ژن40P كد كننده پروتيين چسبندگي مايكوپلاسما است، كه باعث اتصال مايكوپلاسما آگالاكتيه به سلول‌هاي يوكاريوتي، كلونيزه شدن آن در ميزبان و شروع بيماري مي‌شود. ليپوپروتيين 40P يك آنتيژن تحريك كننده ايمني و كانديد مناسب براي واكسن‌سازي است. هدف از انجام اين مطالعه توليد واكسن نوتركيب زيرواحدي با استفاده از كلونينگ ژن 40P در سيستم پروكاريوتي ميباشد. در اين تحقيق، ژن 40P از سه سويه واكسينال مايكوپلاسما آگالاكتيه در ايران تكثير و تعيين توالي شد. توالي ژن 40P منتخب، پس از يك سري تغييرات، سنتز و در پلاسميد كلونينگ كلون شد، سپس به باكتري اشريشياكلي به روش شوك حرارتي انتقال داده شد. پس از تكثير، ژن 40P توسط دو آنزيم برش داده شد. ژن تخليص شده در پلاسميد بياني، جهت انتقال به باكتري بياني كلون شد. نتايج نشان داد كه قطعه 920 نوكليوتيدي ژن 40P از سه سويه واكسينال تكثير شد كه نشانه حضور ژن در آنها مي‌باشد. توالي كامل اين ژن كه شامل 1092 نوكليوتيد بود از پلاسميد كلونينگ جدا و در پلاسميد بياني pET22b+ حاوي شروع كننده و تمام كننده T7 كلون شد. در نهايت پلاسميد نوتركيب در سلول باكتري ترانسفورم شد. كلونينگ ژن 40P اولين قدم در توليد واكسن زير‌‌‌واحدي نوتركيب براي پيشگيري از آگالاكسي دردام مي‌باشد.

The P40 gene encodes adhesion protein that is expected to be involved in adhesion of M. agalactiae to eukaryotic cell and promote host colonization. Lipoprotein P40 is an immunodominant antigen and a vaccine candid. The target of this study is recombinant subunit vaccine, so P40 gene was cloned in prokaryotic system. In this study, the P40 gene of three vaccinal isolated M. agalactiae strains in Iran was amplified and sequenced. After changes, the selected sequence of P40 gene was synthesized and cloned in cloning plasmid, then transformed into Escherichia coli by heat shock protocol. After amplification, P40 gene was digested by two enzymes. Purified gene was cloned in expression plasmid for transforming into expression bacterial cell. The results showed that 920 bp fragment of P40 genes from three vaccinal strains was amplified, so three strains have P40 gene. Complete sequence of this gene was 1092 bp, was extracted from cloning plasmid and cloned in pET22b+ expression plasmid including T7 promoter and terminator. Finally, recombinant plasmid was transformed into bacterial cell. P40 gene cloning was first step in recombinant subunit vaccine production.