استفاده از باكتريوفاژ لامبدا به‌عنوان حامل آپوپتين جهت رسانش موثر آن به درون تومور BT-474 سرطان سينه انساني

Utilization of Lambda bacteriophage as an Apoptin effective delivery platform to the BT-474 human breast carcinoma

زمينه و هدف: آپوپتين، پروتيينی از ويروس آنمی مرغ، عامل القای آپوپتوز به‌طور اختصاصی در سلول‌های سرطانی بوده و به سلول‌های سالم آسيبی نمی‌رساند. باكتريوفاژها نظير فاژ لامبدا را می‌توان تغيير داد تا كاست‌های ژنتيكی را به درون تومورهای سلول‌های يوكاريوتی برسانند و آن‌ها را به‌شكل ايمن بيان كنند. اين مقاله روشی ايمن برای بيان آپوپتين توسط فاژ لامبدا در تومورهای سرطانی انسانی ارايه نموده است. روش بررسی: اين مقاله، مطالعه‌ای تجربی است. كلون حامل ژن آپوپتين تهيه و سپس به درون حامل ژنی CMV-ZAP توسط آنزيم‌های تحديدی BamH1 و HinD-III وارد گرديد و با ميزبانی باكتری اشريشيا كلی به درون فاژ لامبدا بسته‌بندی گرديد. اين ساختار نوتركيب جهت بيان پروتيين آپوپتين در سلول‌ها به روش‌های RT-PCR و Western Blot بررسی گرديد و عملكرد آپوتين در سلول سرطانی BT-474 جهت ممانعت از رشد تومور حاصل از آن در موش‌های Nude مورد مطالعه قرار گرفت. يافته‌ها: ترانسفكت نمودن سلول سرطان سينه توسط فاژ لامبدا كه حامل آپوپتين-CMV-ZAPλ بود، از رشد سلول سرطانی در شرايط آزمايشگاهی جلوگيری نمود و هيچ اثری بر سلول‌های سالم نداشت. بيان اين پروتيين در تومور موشی نيز ديده شد و باعث زنده ماندن موش‌های توموری شد. نفوذ فاژ حامل آپوپتين به درون سلول سرطانی بسيار بالا بود و ترانسفكت نمودن پلاسميد حامل آپوپتين به‌طور مستقيم تاثير كمی در توقف رشد اين سلول داشت. نتيجه‌گيری: باكتريوفاژ لامبدا حاملی بی‌خطر بوده و آپوپتين به‌طور كاملا اختصاصی قادر به از بين بردن تومورهای سرطانی در بدن موجود زنده می‌باشد. چنين ساختاری روشی بسيار مطمئن برای درمان سرطان در انسان خواهد بود.

Background: Apoptin is a protein from chicken anemia virus that could induce apoptosis specifically in the cancer cells but it has not any effect in the normal cells. Phage therapy is a novel field of cancer therapy and phage nanobioparticles (NBPs) such as λ phage could be modified to deliver and express genetic cassettes into eukaryotic cells safely in contrast with animal viruses. The bacteriophages like Lambda could be manipulated to deliver genetic cassettes into eukaryotic cells and express the gene safely. We developed the safe way for the expression of Apoptin gene via Lambda bacteriophage in the human tumors. Methods: At first the Apoptin clone was produced and then transferred into ZAP-CMV plasmid through BamH-I and HinD-III restriction sites. Then this construct inserted into the Lambda phage in the Escherichia coli host cell. The expression of Apoptin in the recombinant construct was evaluated via RT-PCR and Western Blot analysis. The anti tumor function of expressed protein was measured in the BT-474 cells that was hosted by nude mice. Results: Transfection of breast carcinoma cells by Lambda bacteriophage containing λZAP-Apoptin-CMV was inhibited the tumor growth significantly but did not any effect on normal cells. The expression of this protein was very high in tumor cells and prevented the death of tumor bearing nude mice. The penetration and spreading of Apoptin construct by bacteriophage Lambda was significantly high but the Apoptin plasmid had very little expression in BT-474 cell, directly. Transfection with NBPs carrying λZAP-CMV-Apoptin significantly inhibited growth of all the breast carcinoma cell lines in vitro, but had no effect on normal cells. Conclusion: Utilization of recombinant Lambda bacteriophage as a safe expression vector has been confirmed. Apoptin was induced apoptosis specifically in the tumors in vivo. Use of such construct is a very safe way to treat cancer in human. The results presented here reveal important features of λ nanobioparticles to serve as safe delivery and expression platform for human cancer therapy.