شناسايي آلودگي مايكوپلاسما ساليواريوم در كشت‏هاي سلولي با استفاده از روش PCR

Detection of Mycoplasma salivarium Contamination in Cell Culture using PCR Method

هدف: مايكوپلاسما ساليواريوم يكي از گونه‏هاي مايكوپلاسماي اصلي آلوده كننده كشت‏هاي سلولي محسوب مي‏شود و مي‏تواند آثار نامطلوبي را روي كشت‏هاي سلولي ايجاد كند؛ در نتيجه شناسايي اين آلودگي و سرعت تشخيص آن، در كنترل و پيشگيري از اين موضوع اهميت دارد. هدف از اين مطالعه شناسايي آلودگي مايكوپلاسما ساليواريوم در كشت‏هاي سلولي با استفاده از روش واكنش زنجيره پليمرازي (PCR) بود. مواد و روش‏ها: به منظور راه‏اندازي PCR از سويه استاندارد مايكوپلاسما ساليواريوم و آغازگرهاي اختصاصي اين گونه براساس تكثير قطعه‏اي از ژن 16SrRNA استفاده شد و در ادامه حساسيت و ويژگي اين آزمون تعيين شد. نمونه‏هاي مورد بررسي پس از استخراج DNA، از نظر آلودگي به جنس مايكوپلاسما و گونه ساليواريوم مورد آزمايش PCR قرار گرفتند. نتايج: در اين مطالعه تعداد 62 نمونه از كشت‏هاي سلولي ارسالي به آزمايشگاه مرجع مايكوپلاسما در موسسه رازي مورد بررسي قرار گرفتند كه از اين تعداد 42 (75/67 درصد) نمونه از نظر آلودگي به جنس مايكوپلاسما و از اين تعداد 15 (72/35 درصد) نمونه با ايجاد باند در 434 جفت باز از نظر آلودگي به گونه مايكوپلاسما ساليواريوم مثبت بودند. نتيجه‏گيري: با توجه به بالا بودن درصد آلودگي كشت‏هاي سلولي به مايكوپلاسما ساليواريوم، رعايت شرايط آسپتيك توسط پرسنل آزمايشگاه در مراحل آماده‏سازي و كار با كشت‏هاي سلولي توصيه مي‏شود. ضمناً با بهره‏گيري از آغازگرهاي مناسب و اختصاصي امكان شناسايي و تشخيص آلودگي به مايكوپلاسما ساليواريوم در آزمايشگاه‏هاي كشت سلولي، در كمتر از يك روز با استفاده از روش PCR امكان‏پذير است.

Objective: Mycoplasma salivarium (M. salivarium) is one of the most common contaminants present in cell culture laboratories that cause undesirable effects on cell cultures. Thus, the identification and rapid diagnosis in controlling and prevention of this contaminant are important. The aim of this study is the detection of Mycoplasma salivarium contamination in cell culture using polymerase chain reaction (PCR) method. Methods: A 16S rRNA-based Mycoplasma genus and specific primer PCR method for M. salivarium was developed. The sensitivity and specificity of this method were determined. The PCR test was used after we extracted DNA from the cultured isolates. Results: A total of 62 cell culture samples were sent to the Mycoplasma Reference Laboratory at Razi Institute, Karaj, Iran for detection of Mycoplasma contamination. A total of 42 (67.75%) out of 62 samples scored positive according to the Mycoplasma genus. From these 42 samples, 15 (35.72%) reacted positively with a clear band of 434 bp in the M. Salivarium-specific PCR method. Conclusion: Due to the high percentage of M. salivarium contamination in cell cultures, we recommend aseptic conditions be used in the laboratory when working with cell cultures. The PCR method is a suitable and valuable tool for the detection of M. salivarium contamination in cell cultures with appropriate and specific primers. This PCR method can be processed in less than one day.