جداسازي و كشت اوليه ملانوسيت‌هاي پوست انسان و مقايسه‌ي كشت با و بدون فربول‌استر

Primary culture of human skin melanocyte and comparison of culture in the presence and absence of phorbol ester

زمينه و هدف : كشت اوليه به‌دنبال جداسازی سلول‌ها از بافت انجام می‌گيرد. جداسازی و كشت اوليه‌ی ملانوسيت‌ها با توجه به نقش اين سلول‌ها در محافظت از بدن در برابر اشعه‌های مضر خورشيد، ايجاد رنگ پوست، قرنيه و مو بسيار با‌اهميت است. اين مطالعه به‌منظور راه‌اندازی نحوه‌ی جداسازی، كشت و تكثير ملانوسيت‌ها از پيش‌پوست نوزاد و پوست پلك افراد بزرگ‌سال و مقايسه‌ی دو نوع محيط كشت ملانوسيتی انجام شده است. روش بررسی: برای كشت ملانوسيت‌ها از نمونه‌های پيش‌پوست و پلك استفاده شد. اپيدرم از درم، جدا و مخلوط سلولی حاصل از هضم اپيدرم در محيط‌های انتخابی ملانوسيتی كشت داده شد. برای تاييد ملانوسيت‌ها پس از جداسازی و كشت از تكنيك‌های ايمونوسيتوشيمی و واكنش زنجيره پليمراز معكوس استفاده شد. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه كشت در عدم حضور فربول‌استر از لحاظ مورفولوژی و از لحاظ چسبندگی سلولی و ويژگی‌های فيزيولوژيكی ملانوسيت‌ها به‌مراتب مناسب‌تر است. به‌علاوه، در اين بررسی مشخص شد كه ملانوسيت‌های جداشده از پلك افراد بزرگ‌سال به‌مراتب دندريتيك‌تر از ملانوسيت‌های جداشده از پيش‌پوست است و تعداد پاساژهای ملانوسيت‌های حاصل از پيش‌پوست بيش‌تر از ملانوسيت جداشده از پلك می‌باشد.  نتيجه‌گيری: به‌صورت مرسوم برای كـشت ملانوسيـت‌ها از فربول‌اسـتر‌ها استفـاده می‌شود كـه در اين مطالعه كشت در عدم حضور فربول‌استر و با استفاده از فاكتورهای رشد، بهتر و مناسب‌تر بود. به‌علاوه ملانوسيت‌های حاصل از بافت‌های جـوان‌تر هم‌چون پيـش‌پـوست برای تحقيـقات با توجه ميـزان بيش‌تر قدرت تكثير توصيه می‌شود.

Background: Primary culture takes place following the cell isolation from tissues. Isolation and culture of melanocytes based on their roll in the protection of body against hazardous sun rays, production of skin, cornea and hair color is really important. This study was done to set isolation, culture and proliferation of melanocytes from children foreskin and adult eyelashes, and also comparison of two types of melanocyte culture medium. Methods: Human foreskin and eyelash samples were used for melanocyte isolation and culture. After isolation of epidermis from dermis, epidermis cell suspensions were prepared by enzymatic digestion. The isolated cells were cultured in two melanocyte selective culture media. Immunocytochemistary and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assays were used for confirmation of isolated and cultured melanocytes. Results: Our results indicated that isolated melanocyte cultured in the selective medium without phorbol esters is better than the melanocytes cultured in selective medium cont-aining phorbol esters not only morphologically but also physiologically and from the aspect of cell adhesion. In addition, the results showed that isolated melanocyte from adult eyelashes are more dendritic than melanocytes isolated from children foreskin. Conversely, our results indicated that the number of cell passages in melanocyte isolat-ed from foreskin is more than melanocytes isolated from adult eyelashes. Conclusion: Melanocytes cultured in selective medium containing convenient growth factors in absence of phorbol esters show more native physiological and adhesive properties. In addition, melanocyte isolated from younger tissues such as foreskin have better proliferative and sub-culturing properties so we suggest isolation and culture of younger tissues.