بهينه سازي پارامترهاي موثر بر Cut-offسامانه تشخيص سريع مورفين بر پايه روشLateral Flow Assay (LFA)

Optimization of Effective Parameters on Cut-off of Rapid Detection System of Morphine Based on Lateral Flow Assay (LFA) Method

مقدمه: Lateral Flow Assayيك تست تشخيص سريع اعتياد است كه كاربرد فراواني در زمينه شناسايي افراد معتاد دارد. اما مسيله سطح تشخيص اين سيستم همواره به عنوان محدوديتي براي آن مطرح بوده است. مطالعه حاضر به بررسي چگونگي بهبود اين پارامتر و حساسيت سامانه مي پردازد. مواد و روش ها: pH كانژوگاسيون، OD ماده كانژوگه و غلظتBSA - مورفين در باند تست بر سطح تشخيص اين سامانه موثرند. جهت تعيين pH بهينه از كيت«Gold in a box» استفاده شد. با اعمال محلول مورفين در غلظت هاي مختلف، ابتدا با فرض يك غلظت ثابت برايBSA - مورفين، OD بهينه تعيين شد و سپس با ثابت گرفتن مقدار OD، غلظت بهينهBSA - مورفين به دست آمد. در ادامه تاثير دو فاكتور بلوكه نمودن لايه كانژوگه و افزودن قند به ماده كانژوگه نيز بررسي شد. يافته هاي پژوهش: 4/8=pH و 1=OD به عنوان pH و ODبهينه تعيين شد. غلظت بهينهBSA - مورفين در باند تست نيز mg/ml 5/0 به دست آمد. با اعمال شرايط بهينه، سطح تشخيص سامانه به ng/ml25 رسيد و از مقايسه نتايج حاصل از كيت هاي بهينه سازي شده با يك نوع كيت استاندارد، حساسيت و اختصاصيت نتايج برابر 100 و 99 درصد برآورد شد. بحث و نتيجه گيري: يافتن فاكتورهاي اثرگذار بر عملكرد روش تشخيصي لترال فلو و بهينه سازي آن ها مي تواند راهكاري موثر جهت افزايش حساسيت و كاهش سطح تشخيص اين سامانه باشد.

Introduction: Lateral flow assay method is a test for rapid detection of morphine that h-as many applications in identification of ad-dicts. However, detection level of the sys-tem has limited its application. This rese-arch examined how to improve the detec-tion level and sensitivity of this system. Materials & Method: pH of conjugation, OD of conjugated material and concentr-ation of morphine-BSA in the test band w-ere effective on the detection level of this system. To determine optimum pH, a com-mercial kit (Gold in a box) was used. By applying various concentrations of morp-hine solution, and considering a constant concentration of morphine-BSA, the opt-imal OD was set. Then, the optimal conc-entration of morphine-BSA was obtained for a fixed amount of OD. Effect of block-ing the conjugated pad and addition of su-gar to the conjugated substance were also studied. Findings: Optimum values of pH and OD was pH=8.4 and OD=1. Optimum conce-ntration of morphine-BSA in the test band was obtained to be 0.5 mg/ml. Cut-off value of optimized kit attained to 25 ng/ml. After comparing the results with a standard kit, sensitivity and specificity of the optimized kits were 100 % and 99% , respectively. Discussion & Conclusion: Finding and opt-imizing the effective factors on the perf-ormance of diagnostic lateral flow method can be an effective strategy to increase the sensitivity and reduce the detection level of this system.