شناسايي ژن مقاومت بتالاكتاماز CTX-M-1 در اشريشياكلي جدا شده از نمونه‌هاي باليني با روش واكنش زنجيره‌اي پليمراز (PCR)

Detection of CTX-M-1 beta lactamase gene in Escherichia coli isolated from clinical samples by Polymerase Chain Reaction (PCR)

زمينه و هدف: مقاومت به آنتی‌بيوتيك‌های بتالاكتام در ميان ايزوله‌های بالينی، در اكثر مواقع ناشی از توليد آنزيم‌های بتالاكتامازی است. در سال‌های اخير، توليد آنزيم‌های بتالاكتامازی با طيف وسيع (ESBLs) در ميان ايزوله‌های بالينی به‌ويژه باكتری Escherichia coli شيوع فراوانی يافته و از آنجا كه اين بتالاكتامازها شامل چندين زير خانواده می‌باشند، طراحی و استفاده از پرايمرهای يونيورسال به‌منظور شناسايی كامل اين زير خانواده‌ها می‌تواند مفيد واقع شود. توليد آنزيم بتالاكتاماز در باكتری اشريشيا كلی مشكلات فراوانی را در درمان بيماران ايجاد نموده است. ژن CTX-M-1 عامل مقاومت بتالاكتامازی می‌باشد. هدف از اين مطالعه بررسی ميزان ژن CTX-M-1 در باكتری اشريشيا كلی می‌باشد. روش بررسی: در مجموع 500 نمونه ادراری از بيمارستان‌های شهر تهران گردآوری شده؛ پس از كشت بر روی محيط EMB آگار در دمای 37 درجه به‌مدت 24 ساعت و انجام تست‌های بيوشميايی برای تاييد از بين 500 نمونه 200 ايزوله اشريشيا كلی جداسازی شد. بررسی حضور ژن CTX-M-1 با استفاده از روش PCR بر روی ايزوله‌هايی كه در تست‌های تشخيصی Diffusion agar disk و Combined disk جداسازی شده بود انجام گرفت.  يافته‌ها: از 200 سويه مورد بررسی 128 (%64) سويه مولد بتالاكتامازهای وسيع‌الطيف بوده، پس از طی پروسه PCR برای شناسايی ژن CTX-M-1 نشان داد از 128 سويه بتالاكتامازهای وسيع‌الطيف مثبت 99 ايزوله (34/77%) حاوی ژن مورد نظر بوده است.  نتيجه‌گيری: نتايج حاصل شده از اين مطالعه درصد بالای مقاومت بتالاكتامازی را در بين سويه‌های اشريشيا كلی نشان می‌دهد. اين مسئله يك خطر عمومی جدی را خاطر نشان می‌سازد كه بايد همه اقدامات برای جلوگيری از اين خطر صورت گيرد.

Background: Resistance to beta-lactam antibiotics in clinical isolates frequently results from the production of β-lactamase enzymes. In recent years, the production of extended spectrum β-lactamases (ESBLs) and AmpC β-lactamase have greatly increased, especially in clinically isolated Escherichia coli. On the other hand, beta lactamase genes have several subfamilies and designing universal primers could be valuable in their detection. The beta-lactamase-producing E. coli which is resistant to beta-lactam antibiotics may pose a great risk to the patients. The CTX-M-1 gene is responsible for beta lactamase resistance. The purpose of this study was to find the percentage of CTX-M-1 carrying E. coli strains. Methods: A total of 500 urine samples were collected from different hospitals in Tehran, Iran during September to February 2009. The samples were cultured on EMB agar and incubated at 37 C for 24 hours. Some biochemical tests were carried out on the isolated samples. The presence of CTX-M-1 gene was determined by PCR on the isolates already identified phenotypically by disk diffusion agar and combined disks. Results: In general, 200 out of the initial 500 samples were identified as E. coli, among which 128 (79.5%) were ESBLs producing strains. PCR used for the detection of CTX-M- 1 gene, showed that 99 (77.34%) out of 128 isolates contained such gene. Conclusion: The results of this study showed a high percentage of β-lactamase resistant E. coli strains. This is a serious matter and would pose a public hazard and every step should be taken to avoid such hazard.