ارزيابي حساسيت و ويژگي روش تكثيري بر پايه اسيد نوكلييك براي تشخيص عامل ليشمانيوزيس جلدي

Sensitivity and Specificity of Nucleic Acid Sequence-Based Amplification Method for Diagnosis of Cutaneous Leishmaniasis

زمينه و هدف: روش ميكروسكوپي همراه با كشت، روش استاندارد طلايي براي تشخيص انگل ليشمانيا است . استفاده از روش هاي ملكولي از جمله روش RT-PCR براي تشخيص اين بيماري در مقايسه با روش هاي ميكروسكوپي از حساسيت و ويژگي بالاتري برخوردار است. اما با توجه به گراني تجهيزات آن و زماني كه براي انجام آن صرف مي-شود به صورت گسترده مورد استفاده قرار نمي گردد. استفاده از روش تكثيري بر پايه ي اسيد نوكلييك (NASBA) به دليل عدم نياز به دستگاه ترموسايكلر و همچنين شناسايي انگل زنده، داراي ارزش بالايي است. هدف از اين مطالعه، بررسي حساسيت و ويژگي NASBA براي تشخيص ملكولي عامل ليشمانيوزيس جلدي مي باشد. روش بررسي: از 28 نمونه زخم پوستي مشكوك به ليشمانيوزيس جلدي، RNA انگل استخراج شد. سپس به كمك پرايمرهاي اختصاصي طراحي شده براي ناحيه ي 18srRNA ليشمانيا، اين ناحيه به وسيله ي واكنش ايزوترمال NASBA مورد تكثير قرار گرفت و در جهت افزايش حساسيت، محصول واكنش تكثيري به وسيله پروب فلورسانس ملكولي SYBER Gold در بافر TBE(1X) الكتروفورز شد. همچنين با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي، بر روي نمونه ها واكنش RT-PCR نيز انجام شد. يافته ها: دراين مطالعه روش NASBA و روش RT-PCRبراي تشخيص انگل ليشمانيا در زخم به ترتيب از حساسيت 81 درصد و 51 درصد و ويژگي 100 درصد برخوردار بودند. نتيجه گيري: روش ايزوترمال NASBA با حساسيت و ويژگي بالا به منظور شناسايي ليشمانيوز جلدي مي توان استفاده كرد. واژه هاي كليدي: ليشمانيوزيس جلدي، NASBA، 18S rRNA.

Background and Objective: Culture, microscopic method is a gold standard method for identification of Lishmania parasite. The use of Molecular methods such as RT- PCR compared to microscopic methods has a higher sensitivity and specificity; however, it is not widely used due to its expensive equipment and the time requested. The use of nucleic acid sequence based amplification (NASBA) method is highly valuable for diagnosis of live parasite because there is no need for to use Thermo cycler. We aimed to assess sensitivity and specificity of NASBA for molecular detection of cutaneous Leishmaniasis. Material and Methods: First, the RNA was extracted from 28 skin biopsies suspected cutaneous Leishmaniasis. Then, by means of specific primers designed for 18srRNA region, this region was amplified using NASBA isothemal amplification. To increase the sensitivity, the product was electroforesed in TBE (IX) buffer, using Syber Gold Flourecent probes. Using specific primers, RT- PCR was conducted on the samples too. Result: For diagnosis of Leishmania parasites, NASBA and RT-PCR had the sensitivity of 81% and 51%, respectively, and specificity of 100%. Conclusion: NASBA isothermal method with high sensitivity and specificity can be applied for identification of cutaneous leishmaniasis. Keywords: Cutaneous Leishmanisis, NASBA, 18S rRNA