غربال‏گري، خالص‏سازي و شناسايي دياتومه‏هاي سيستم تصفيه پساب خروجي شركت پالايش نفت كرمانشاه

Isolation, Screening and Identification of Diatoms from Kermanshah Oil Refinery Wastewater Treatment Systems

مقدمه: وجود پالايشگاه‏هاي متعدد در ايران، اهميت تصفيه پساب را توجيه مي‏كند. ريز جلبك‏ها با توجه به تنوع و كاربرد‏ فراوان، در اين امر برتري دارند. از ريزجلبك‏هاي موثر، مي‏توان به باسيلاريوفايت، كه به دياتومه‏ها معروف هستند، اشاره كرد كه از نظر اكولوژي بسيار موفق هستند. بهترين روش، جستجوي دياتومه‏ها در محل آلودگي است. با توجه به مطالعات پالمر، با شناسايي گونه‏هاي مقاوم، مي‏توان از آن‏ها به عنوان يك شاخص آلودگي آلي، براي تخمين كيفيت آب استفاده كرد. محاسبه حجم زيستي هر سلول، به عنوان اندازه‏گيري توده زيستي نسبي است. با مطالعه دياتومه‏هاي سيستم تصفيه پساب خروجي شركت پالايش نفت كرمانشاه، علاوه بر كمك به غناي گونه‏اي كشور، مي‏توان گونه‏هاي مقاوم به آلودگي نفتي را شناسايي و معرفي كرد، تا در مطالعات بعدي براي تصفيه زيستي استفاده شود‏‏. مواد و روش‏‏ها: از 6 ايستگاه تعيين شده در سيستم تصفيه پساب شركت پالايش نفت كرمانشاه، نمونه‏برداري انجام شد. پس از انتقال به آزمايشگاه و با تهيه سري رقت از نمونه‏ها در محيط بي جي مايع، و در طي پاساژهاي متوالي و متعدد ريزجلبك‏ها خالص‏ شدند. سپس، دياتومه‏ها با كلوني‏‏هاي قهوه‏اي در پليت‏هاي جديد پاساژ داده شدند. نمونه‏ها توسط ميكروسكوپ نوري و با استفاده از كليد‏هاي شناسايي معتبر، شناسايي شدند. ميانگين مساحت و حجم زيستي سلول‏ها، بر حسب ميكرو‏متر مربع با استفاده از روش هيلبراند ، محاسبه شد. نتايج: عدم رشد باكتري در محيط نوترينت آگار پس از 48 ساعت، نشان دهنده موثر بودن روش خالص‏سازي به كار برده شده با استفاده از آنتي‏بيوتيك كلرامفنيكل بود. همچنين، در اين پژوهش، با استفاده از كليد‏هاي شناسايي معتبر رده‏هاي مختلفي از دياتومه‏ها شناسايي شد، كه بيشتر به جنس‏هاي نويكولا، نيتزسشيا و فراستوليا متعلق بودند. در ميان جنس‏ها و گونه‏هاي شناسايي شده، گونه فراجيلاريا كاپوسينا داراي بيش‏ترين حجم زيستي در سلول بود. بحث و نتيجه‏گيري: در بررسي جنس‏ها و گونه‏هاي سيستم تصفيه پساب شركت پالايش كرمانشاه، به علت آلودگي، تنوع دياتومه‏ها بسيار پايين بود. بسياري از جنس‏هاي شناسايي شده مطابق با گزارشات قبلي بود. فراجيلاريا كاپوسينا حجم بيشتر توده زيستي نسبي را تشكيل داد. بر طبق جنس‏هاي شناسايي شده و شاخص پالمر، پساب خروجي شركت پالايش نفت كرمانشاه، آلودگي كمابيش بالايي دارد. همچنين، با توجه به اين پژوهش، مي‏توان جنس‏هاي فراجيلاريا و پينولاريا را به عنوان جنس‏هاي جديد مقاوم به آلودگي نفتي گزارش كرد.

Introduction: There are many oil refineries in Iran, so waste water should be treated. Algal remediation is one of the best methods. The class of Bacillariophyta (diatoms) has distinct ecological preferences and tolerances, making them useful indicators of contemporary ecological conditions. Isolation and selection of microorganisms is the first step in bioremediation. Palmer assessed the tolerance of algal species to organic pollution, and incorporated the data into an organic pollution index for rating water quality. Biovolume is used as a measure of relative algal biomass. The present work was conducted to isolate and select the tolerance diatoms from Kermanshah Oil Refinery wastewater treatment systems. This helped to improve diatoms community of Iran and prepare a list of tolerance diatom in bioremediation. Materials and methods: Wastewater samples were collected aseptically at six points in and transferred to the laboratory. The serial diluted were prepared in BG broth, and then samples were cultured into Bristol agar and BG agar with chloramphenicol. Finally they were cultured in NA to assurance that there are no bacteria. The brown diatoms colonies were cultured in new plates. The samples were observed through microscope, and keys were used to classify them. Also biovolume according to geometric shapes (um3) were calculated. Results: There was no bacterial growth after 48 hours thus this method is an applied method in order to isolate diatoms. A variety of classes were observed such as Navicula, Nitzschia and Frustulia. Analysis of the biovolume revealed that the species of Fragilaria capucina has the maximum biovolume. Discussion and conclusion: This research revealed that the diatoms diversity in Kermanshah Oil Refinery wastewater treatment systems is low due to the high rate of organic pollution according to Palmer index. Also Pinnularia, Fragilaria can be used in the list of tolerance diatoms. Key words: Diatoms, Kermanshah Oil Refinery, Wastewater, Screening