توليد و تخليص آنتي‎بادي پلي‎كلونال عليه تتانوتوكسين

Polyclonal Antibody Production and Purification against Tetanospasmin

مقدمه: كزاز نوعي بيماري دستگاه اعصاب است كه با افزايش صلابت و گرفتگي‌هاي عضلات مشخص مي‌شود. عامل اين بيماري كشنده، توكسين كلستريديوم تتاني مي‌باشد. تتانواسپاسمين شامل سه زنجيره L،‌ HN و HC مي‌باشد. زنجيره HC بخش اتصال‌دهنده و ايمونوژنيك آن است و به عنوان كانديد واكسن مطرح مي‌باشد. هدف از اين مطالعه استفاده از ژن صناعي زنجيره HC تتانواسپاسمين و بررسي ايمني‌زايي پروتيين نوتركيب حاصل از آن و نهايتاً تهيه سرم و آنتي‌بادي پلي‌كلونال عليه آن مي‌باشد. مواد و روش‌ها: از ميزبانE. coli Bl21 DE3 ، داراي وكتور pET28a حامل ژن نوتركيب زنجيره HC تتانوتوكسين، جهت بيان و تخليص پروتيين نوتركيب مورد مطالعه استفاده شد. ايمني‌زايي آن در حيوان آزمايشگاهي صورت گرفت. ضمن بررسي تيتر آنتي‌بادي، آنتي‌بادي پلي‌كلونال عليه تتانوتوكسين از سرم تخليص گرديد. يافته‌ها: پس از بهينه‌سازي بيان و تخليص، پروتيين نوتركيب بياني حاصل با وسترن‌بلاتينگ تاييد گرديد. ايمني‌زايي در مدل موش نشان از تيتر بالاي آنتي‌بادي عليه پروتيين نوتركيب داشت. تخليص آنتي‌بادي پلي‌كلونال از سرم حيوانات ايمن به روش ستون G انجام گرديد. نتيجه‌گيري: توليد پروتيين نوتركيب بخش HC و بررسي ايمني‌زايي آن، نشان‌دهنده تيتر بالايي از آنتي‌بادي پلي‌كلونال در سرم حيوان عليه تتانوتوكسين مي‌باشد.

Background: Tetanus is a kind of neurological disease characterized by rigidity and spasm of muscles. The causative agent of this fatal disease is known as Tetanus Toxin, Clostridium tetani. The Tetanospasmin consists of three chains: HN, HC and L. The HC chain is binds domain and immunogenic part of toxin, so it is proposed as a vaccine candidate. In this study, the recombinant HC protein obtained from synthetic HC gene was investigated for its immunogenicity. Additionally, antiserum and polyclonal antibody was prepared against this agent. Materials and Methods: Recombinant His-tagged Hc protein was expressed in Escherichia coli Bl21 DE3 and purified with Ni-NTA column. Then, rHc protein was used for animal immunization. Along with survey of antibody titer, serum polyclonal antibody was purified by G column. Results: After gene optimization, expression and purification, rHC protein was confirmed by western blot technique. Immunization of mice showed high titer of antibody against recombinant protein. Antibody purification from immunized animal serum was carried out as well. Conclusion: The recombinant HC protein production and its immunogenicity investigation showed high titer of antibody against Tetanospasmin.