انجماد شيشه‏اي باعث افزايش وقوع مرگ سلولي برنامه‏ريزي شده و فعاليت كاسپاز 7/3 در بافت تخمدان انساني نمي‏شود

Vitrification does not Increase the Incidence of Apoptosis and Caspase 3/7 Activity in Human Ovarian Tissues

هدف: هدف از اين مطالعه ارزيابي وقوع مرگ سلولي برنامه‏ريزي شده (آپوپتوز) در بافت تخمدان انساني انجماد شيشه‏اي شده در مقايسه با گروه كنترل به وسيله مطالعات مورفولوژيك و چندين روش ارزيابي آپوپتوز بود. مواد و روش‏ها: قطعات قشر بافت تخمدان انسان از 30 نفر تحت عمل سزارين گرفته شد و در محيط Leibovitz L-15 طي 2 ساعت به آزمايشگاه منتقل شدند. سپس قشر تخمدان به قطعات كوچكي بريده و به صورت تصادفي در دو گروه انجماد شيشه‏اي و كنترل غير انجمادي تقسيم‏بندي شد. ارزيابي ميزان وقوع آپوپتوز به وسيله مطالعات ريخت‏شناسي و روش‏هايي چون تانل، طرح نردباني DNA و بررسي سطح بيان پروتيين‏هاي كاسپاز 7/3 به روش لومينوسنت، در بافت تخمدان صورت گرفت. نتايج: نشانه‏اي از تغييرات ريخت‏شناسي مرتبط با مرگ سلولي آپوپتوز در بافت تخمدان انسان پس از انجماد شيشه‏اي و ذوب ديده نشد. نشانه‏هاي آپوپتوزي و طرح نردباني DNA در گروه انجمادي مشاهده نشد. سطح كاسپاز 7/3 در دو گروه غير انجمادي و انجمادي به ترتيب 271/89±2231، 19/169±2294 RLU بر ميلي‏گرم پروتيين بود و بين دو گروه تفاوت معني‏داري وجود نداشت. نتيجه‏گيري: ريخت‏شناسي بافت تخمدان انسان پس از انجماد شيشه‏اي به خوبي حفظ شد به طوري كه روش انجمادي ارايه شده در مطالعه حاضر باعث افزايش آپوپتوز و نيز فعاليت كاسپاز 7/3 در بافت تخمدان نشد.

Objective: This study aimed to evaluate the incidence of apoptosis in vitrified and non-vitrified human ovarian tissue by the use of morphological analysis and apoptosis assay techniques. Methods: We obtained human ovarian tissue biopsies from 30 women who underwent elective caesarean sections. Tissues were transported to the laboratory in pre-warmed, equilibrated Leibovitz L-15 medium within 2 hours. The tissues were cut into small pieces and divided into two groups, vitrified and non-vitrified (control). Apoptosis incidence was assessed by light microscope and the TUNEL assay and DNA laddering. Evaluation of caspase 3/7 protein levels was performed by the luminescent assay. Results: We observed no morphological signs of apoptosis in the vitrified samples. There were no apoptosis signals as evidenced by TUNEL staining and no DNA laddering pattern observed in the vitrified group. Caspase 3/7 activity was 2294±169.19 RLU/µg protein in the non-vitrified control group and 2231±89.271 RLU/µg protein in the vitrified group, which was not significantly different. Conclusion: The structure of human vitrified ovarian tissue was well preserved. Vitrification could not increase apoptosis and caspase 3/7 activity in human ovarian tissue.