ترانسداكشن لنتي ويروسي ميكرو RNAlet-7f منجر به افزايش بيان ژن HNF4a در سلول‏هاي بنيادي جدا شده از بافت چربي انساني مي‏شود

The let-7f microRNA Functions as a Negative Regulator of HNF4a Expression in Human Adipose Tissue-derived Stem Cells

هدف: ميكروRNA ها، RNA هاي غير كد كننده‏اي است كه به‏عنوان تنظيم كننده چندين فعاليت زيستي مثل متابوليسم، تكثير و تنظيم سلولي عمل مي‏كند. مطالعات اخير نشان دهنده پتانسيل بالاي اين مولكول‏هاي كوچك در تمايز سلول‏هاي بنيادي به سلول‏هاي مشخص است. هدف از مطالعه حاضر ارزيابي اثر let-7f بر بيان ژن عامل هسته‏اي كبد (HNF4a) و عوامل خاص كبدي از جمله آلبومين، آلفا فيتوپروتيين، سيتوكراتين 18 و سيتوكراتين 19 در سلول‏هاي بنيادي جدا شده از بافت چربي انساني است. مواد و روش‏ها: سلول‏هاي بنيادي جدا شده از بافت چربي تحت تاثير آنزيم كلاژناز نوع I از بافت چربي انساني استخراج شده و سپس با استفاده از لنتي‏ويروس‏هاي حاوي مهار كننده let-7f و Scramble (كنترل منفي) ترانسداكت شدند. سپس تغيير در سطح بيان ژن‏هاي HNF4a، آلبومين، آلفا فيتوپروتيين، سيتوكراتين 18 و سيتوكراتين 19 در زمان‏هاي متفاوت با استفاده از روش Real-time PCR بررسي شد. نتايج: كارآيي ترانسداكشن ناقل‏هاي لنتي ويروسي در سلول‏هاي بنيادي جدا شده از بافت چربي انساني بيش از 80 درصد بود كه با بررسي بيان پروتيين فلورسانت سبز ارزيابي شد. نتايج Real-time PCR نشان داد كه مهار let-7f در سلول‏هاي بنيادي جدا شده از بافت چربي انساني منجر به افزايش معني‏دار در بيان ژن‏هاي خاص كبدي در مقايسه با كنترل منفي مي‏شود. همچنين بيان ژن HNF4a روز چهاردهم بعد از ترانسداكشن افزايش داشت كه تاييد كننده سركوب ژن HNF4a توسط let-7f است. نتيجه‏گيري: نتايج اين تحقيق نشان داد كه let-7f به‏عنوان يك تنظيم كننده منفي در بيان ژن HNF4a عمل مي‏كند و مهار let-7f منجر به افزايش بيان نشانگرهاي ويژه كبدي مي‏شود. بنابراين مهار let-7f مي‏تواند ابزار موثري در به راه‏اندازي تمايز سلول‏هاي بنيادي جدا شده از بافت چربي انساني به سمت رده هپاتوسيتي باشد.

Objective: microRNAs (miRNAs) are noncoding RNAs that function as key regulators of diverse biological activities such as cellular metabolism, cell proliferation and cell cycle regulation. Recent studies have indicated the high potential of these small molecules to control stem cell differentiation into desired cells. The aim of present study is to investigate the possible effect of let-7f on expression of hepatic nuclear factor 4 alpha (HNF4a) and some hepatic specific factors such as albumin (ALB), alpha fetoprotein (AFP), cytokeratin18 (CK18) and cytokeratin19 (CK19) in human adipose tissue derived stem cells (hADSCs). Methods: ADSCs were isolated from human adipose tissue using collagenase type I and were transduced by recombinant lentiviruses that contained human inhibitor let-7f and Scramble (negative control). Afterward, the expressions of HNF4a, ALB, AFP, CK18 and CK19 were evaluated by Real-time PCR at different time points. Results: Transduction efficiency of lentiviral vectors into ADSCs was more than 80% as judged by the expression of the GFP reporter gene. Real-time PCR analysis revealed that inhibition of let-7f in hADSCs resulted in significant up regulation of hepatic specific genes compared with the negative control. The expression level of HNF4a also increased in experimental cells at day 14, which supported the suppression of HNF4a expression by let-7f. Conclusion: The results of this study identified let-7f as a negative regulator of HNF4a expression in hADSCs and increased the expression of hepatocyte specific factors through silencing of let-7f. Therefore, suppression of let-7f could be a considerable tool for hepatic differentiation of hADSCs.